细胞划痕实验操作注意事项由普拉特泽生物技术为大家总结分享。普拉特泽生物——细胞实验平台承接细胞划痕实验多例，总结了大量细胞划痕实验操作的技巧与方法。

        细胞划痕实验是检测细胞迁移运动中一种性价比较高的体外研究方法。其基本原理：当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，这个区域称之为“划痕”，划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。这种过程类似体外伤口愈合过程，因此又称之为伤口愈合实验，可以用来观察外源性因素对细胞迁移运动的影响，如药物、响应刺激、基因等。

        细胞划痕实验的操作虽然过程简单快速，但想得到比较理想的实验结果也要注意很多实验样本和操作的细节，今天小编就来分享一些我们细胞平台的技术操作时的各种注意事项，一起学习：

1、细胞的选取：通常永生化的细胞系和原代细胞常用作这方面的模型，如角质形成细胞和成纤维细胞。避免选取生长特别缓慢的、贴壁十分不牢固的或者堆积生长的细胞。

 2、细胞培养的密度；划痕实验一般是几种细胞的结合，但是每种细胞的生长速度会不一样，所以需要按照细胞的生长特性调整培养时间，细胞铺满孔底时划痕的效果会比较好，建议是100%的铺满。

3、细胞培养方式：细胞培养方式一定要改成无血清或者低血清的培养基。细胞划痕实验意指细胞迁移而不是细胞增殖，因此需要将细胞增殖的影响降到最低。当然，一定程度上无血清培养可以忽略细胞增殖的影响，但由于细胞内信号传递的负面影响，细胞迁移的速度也会慢很多。培养环境要求37 ℃ 5% CO 2的培养箱，选取合适的时间点取样拍照。

4、铺细胞最好使用 6 孔板，因为 6 孔板可以保证有相当距离的平直划痕，而且因为有5 条定位线，与划痕相交，这样就有 10 个可固定监测点，不作重复，误差也很小。

5、如果连续监测 24 小时，你需要考虑到划痕缩小是细胞迁移和细胞繁殖共同作用的结果，而不是单纯的细胞迁移。如果你要单纯的考虑细胞迁移，你可以先用丝裂霉素（1 μg/ml）处理一小时，抑制细胞的分裂，这样你的结果就是细胞迁移的作用了。另外，使用无血清培养基也可以降低增殖对实验结果的影响。

6、照片拍完之后，可以用 image J 来测量划痕区域的像素定量比较细胞迁移的速度。

7、虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响，但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节，细胞迁移的速度也会慢很多。

8、用枪头画线时尽量垂直，以6孔板为例 ，一个孔可以画6条线

9、画线之后一定要用PBS洗两次，以去除划下的细胞

10、注意培养方式一定要改成无血清或者低血清的培养基，因为：划痕后用无血清培养基培养细胞，意在说明在监测的 24 小时内，划痕的缩小是细胞 迁移作用的结果，所以要将细胞增殖造成细胞迁移的影响降到蕞低；但若细胞改成无血清培养后大面积漂浮，需要适量加入血清浓度不能高于2%。

11、（5）放入37℃ 5% CO2培养箱，培养。可按0，10，12，15时间点取样，拍照(具体时间依实验需要而定)。

12、（6）统计方法：使用Image J软件打开图片后，抓取自己画的线条，计算细胞间距离的平均值。

        细胞划痕实验作为研究细胞迁移能力的基础实验，每一步都非常的重要，怎样可以经济实惠的把实验做完而得到一份高质量的结果，小编就把技巧和注意事项分享给大家了，希望可以帮到您，您有细胞划痕和各类细胞实验外包与代做的需求，请一定要认准普拉特泽生物！我们下期见！