细胞常用培养基介绍与培养液配置方法
来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台
体外培养动物细胞已有近百年的历史,人工合成培养基的问世促进了细胞培养工作的发展。当粉剂合成培养基配置成液体后称为培养液,其主要成分是氨基酸、维生素、糖类、无机离子以及其他成分。合成培养基种类很多,常用的有十多种,目前使用最广泛的是RPMI 1640,MEM,DMEM和DMEM/F12。
RPMI 1640培养基:最初为培养小鼠白血病细胞的需要而制备。开始的配方适合悬浮细胞的生长,主要针对淋巴细胞,后经几次改良从RPMI 1630,1634而至1640,其成分较为简单。现发现它适应于多种类型细胞的生长,包括肿瘤细胞以及很多正常组织细胞体外培养。
MEM培养基:是最低必需培养基,主要是贴壁细胞的培养,修改配方后也可用于其他类型细胞培养,例如如无钙(Ca)MEM培养基可被用于悬浮细胞的培养,而Hank’s平衡盐的MEM培养基可被用于二倍体细胞的培养。
DMEM 培养基:DMEM细胞培养基是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量,同时又分为高糖型(4500mg/L)和低糖型(1000mg/L)。而MEM中葡萄糖含量1000mg/L。DMEM-高糖型适合生长较快、附着性较差的肿瘤细胞,克隆细胞,也可用于DNA转染的转化细胞的培养;高糖型使细胞生长过快,不利于融合细胞的染色体稳定,做单抗细胞融合时,一般使用低糖型,DMEM-低糖型主要用于干细胞的培养。
DMEM/F12(1:1) 培养基:DMEM培养基营养成分浓度较高,F12培养液成分复杂,含有多种微量元素。DMEM和F12以1:1结合,称为DMEM/F12培养基,该培养基适用于血清含量较低条件下细胞培养,常用于细胞的克隆生长及干细胞培养。
培养液的配置方法大致相同,如下:
1.取一袋干粉培养基,将干粉培养基溶于欲配制液体总量2/3的三蒸水,冲洗包装袋2次倒入培养液中,加入磁性搅拌棒并置于磁力搅拌器上充分搅拌,确保培养基干粉充分溶解。
2.按照产品说明的要求和实验需要补加NaHCO3。
3.调整培养液pH值,用pH计或pH精密试纸观察调整结果达到pH7.2-7.4。
4.将上述溶液用0.22μm微孔滤膜过滤除菌。
5.将过滤除菌的培养液分装于贴有标签的无菌贮液瓶中,加盖瓶塞,密封4℃冰箱存放。
注意:
1. 培养液配制后应进行无菌实验,以检测培养液是否有污染。
2.每批次配制液体数量以使用2周左右为宜,以免时间过长造成营养成分损失。