前两篇我们总结了Transwell检测实验报告、Transwell迁移实验报告；今天来重点学习学习Transwell侵袭实验具体实验流程，下面链接可以直接点开跳转哦。
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链接奉上，那现在我们来接着Transwell侵袭实验报告：

一、实验目的

通过Transwell实验检测Hela细胞转染CDC20-sgRNA3或SP600125处理后其侵袭能力的变化。

二、实验样品及分组

1. 实验样本

备注：包括干预细胞用的相关试剂均按实验样品登记，每行登记一个或一组独立样品

2. 实验分组

细胞：Hela

分组：sgRNA-NC、CDC20-sgRNA3

处理：Con（0.1% DMSO）、SP600125处理（20 μM，48h）

三、实验结果

四、实验材料

1. 主要实验仪器

2. 主要实验试剂及耗材

五、实验原理

阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成DNA脂复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前实验室最方便的转染方法之一，其转染率较高，优于磷酸钙法；由于脂质体对细胞有一定的毒性，所以转染时间一般不超过24小时。

侵袭：侵袭是Transwell实验的一种，将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，小室底部铺了一层聚碳酸酯膜相隔。聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶，用以模仿体内细胞外基质，细胞欲进入下室，先要分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质胶降解，方可通过聚碳酸酯膜。通过结晶紫然后后测定细胞计数值可反映肿瘤细胞的侵袭能力。细胞侵袭实验可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。

六、实验步骤

1.细胞复苏

(1) 将ddH₂O预温至37℃。

(2) 戴上手套和口罩帽子，从液氮罐中取出装有目的细胞的冻存管（内有1 mL细胞混合液），立即投入37℃ ddH₂O中，轻摇冻存管使之在1分钟内快速溶解。

(3) 完全溶解后，75%酒精擦拭冻存管外壁消毒后带进超净台。

(4) 在超净台中，在15 mL灭菌离心管中预先加入10 mL新鲜配制的培养基，打开冻存管，将所有冻融的细胞悬液加入该离心管中，常温1000 rpm离心3分钟，吸除上层的培养液。

(5) 1mL培养基重悬细胞沉淀，轻轻吹打混匀后加入T25细胞培养瓶中，补足培养基至5 mL，置于37℃、5% CO₂培养箱培养。

(6) 48小时后换液，细胞融合接近80%时即可传代。

2. 细胞培养

Hela细胞用含10%胎牛血清、1%双抗的DMEM培养基在37℃饱和湿度、含5%CO₂的孵箱中培养。

3. 细胞转染

(1) 铺板：处于对数生长期的目的细胞，胰蛋白酶消化成单细胞悬液，按实验需要接种于6孔板（2×10⁵个细胞/孔），根据细胞大小和形状调整接板细胞量。

(2) 培养：37℃、5%CO2培养箱中过夜培养，待细胞长至50%~60%汇合度进行转染。

(3) 质粒和脂质体准备：用125μL不含血清的培养基孵育4μg目的片段；125μL不含血清的培养基孵育8μL Lipo汉恒，静置5min；将含质粒和含有脂质体的培养基混合，混匀后室温静置20min。

(4) 弃去板中原有培养基，把混合液加入到细胞培养板中；4~6h后换成完全培养基。

(5) 继续培养24-48h。

4. 侵袭实验

(1) 用无血清培养基稀释Matrigel基质胶，小室各加100μl（20-30μg/孔），放入37℃培养箱中待其凝固，出现“白色层”取出小室；

(2) 取出小室后，加入500 μL无血清培养基，放入37℃培养箱中水化30min；

(3) 吸掉已充分浸润基底膜后小室内的培养基；

(4) 侵袭：胰酶消化收集状态良好的目的细胞（已转染），制成单细胞悬液（无血清培养基配置，药物处理组含药物）；上室加200μL已调节好细胞密度的细胞悬液（2×10⁴个）；下室加500μL全培养基（小室外，24孔板孔内；药物处理组含药物）；

(5) 于37℃、5% CO₂细胞培养箱培养相应时间；

(6) 用4%多聚甲醛室温固定20min，用棉签轻柔擦拭以去除侵袭小室内未侵过基底层膜的细胞，以及基底层（Matrigel），小心操作以免刺穿底层聚碳酸酯膜；

(7) 在新的24孔板孔中加500μL结晶紫，分别将侵袭小室浸入室温染色10 min；

(8) 用PBS冲洗掉小室上多余的染料，置于空气中晾干；

(9) 100倍显微镜拍照，再用PS计数，计算各孔穿过膜的细胞数量。

好啦，Transwell侵袭实验报告我们就简单介绍到这里啦，同学们有没有一个简单的了解呢？不懂得可以给客服留言技术给您详细解答。下一篇再详细为大家介绍Transwell诱导单层细胞屏障，普拉特泽生物大家透彻Transwell实验的检测过程。当然若果您有 Dot Blot实验方法或其他医学科研实验外包的需求，欢迎随时咨询哦