大家好呀，今天给大家分享的是Southern Blot印迹杂交实验操作过程中的一些常见问题与注意事项，快点学起来吧。普拉特泽生物分子检测平台转为科研人提供Southern Blot实验代做与技术咨询服务，用最专业的科研硬实力做您科研科路上的挚友

   关于Southern Blot实验操作别人常问的问题主要是两个：

   1、针对不同的实验材料，Southern杂交实验难度有差异么？答：不同的实验材料，在进行试验过程中难度差异很大，例如玉米、小麦、葡萄的Southern杂交检测难度要比普通的材料要大。

   (1)、物种本身的基因组较大（例如小麦），检测操作难度大

   (2)、材料本身含有高糖多酚（例如葡萄）严重影响酶切操作

   (3)、物种品系复杂（例如玉米），在基因组信息研究层面还不透彻。

   2、核酸质量对Southern杂交实验的影响

   答：核酸质量对实验的影响是直接的，既要求客户提供的总量足够——实验消耗（上样量），又要求保证质量——按要求准备材料。上样量指的是基因组DNA酶切消化后，回收后的DNA片段的量。根据不同物种的基因组大小不同，上样量也有所区别。基因组越大，上样量越多。例如，拟南芥大概需要3ug ，酵母3ug，人8ug，小麦15ug。酶切消化之后不能直接上样，需要回收纯化。回收会有损失，最多能损失一半，所以需要客户提供足够量的样品，一般要求至少20 ug的基因组DNA。（以上上样量均为一个泳道）DNA 样品一般对 OD 值和浓度有如下要求：OD260/280=1.8～2.0，OD260/230＞2.0，浓度≥100 ng/ul 。同时，需要对 DNA 样品进行琼脂糖凝胶电泳，电泳结果显示该 DNA 样品无蛋白质和 RNA 等物质污染，无降解弥散，条带清晰。

   那么实验的操作过程中我们要注意的是Northern杂交和Southern杂交之间最大的区别在于一开始的凝胶分离步骤。因为单链RNA容易形成二级结构，因此RNA样品在电泳时必须在变性条件下才能获得好的分离效果。总RNA和poly(A+) RNA都能用于Northern Blot,不过总RNA效果会差点因为非特异性杂交会使背景变深。Northern Blot能够检测到约5 pg RNA量，而通常mRNA量只占总RNA的0.5%。因此要得到大于5 pg mRNA，起始总RNA量要大于100ng。

   那么关于southern blot实验操作中的注意事项和常见问题咱们就讲完啦，还有不懂的欢迎电话留言咨询，需要southern blot实验外包的服务普拉特泽也是当仁不让的哦！

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