双荧光素酶报告基因实验常见问题与解答由普拉特泽生物分子检测平台给大家总结分享，文尾附上视频教程供大家学习。普拉特泽生物更承接包括线下双荧光素酶报告基因检测等各类生物实验外包服务，旗下科研培训品牌《春风学院》为广大科研人员提供线上下6大国自然专题精讲、15项常用实验技能讲解与实操培训课程，彻底提高您的实验操作技能。

   好了话不多说我们来看看天才同学们的提问吧：

   Question1：什么是双荧光素酶报告基因测试系统（DLR）?

   A：DLR测试系统灵敏，方便，在一个系统中用于测量两个单独的荧光素酶报告基因， 萤火虫荧光素酶及海洋海肾荧光素酶 (Renilla reniformis)，DLR测试系统可用于细胞裂解物及无细胞的翻译系统。

   Question2：用双报告基因有何优点?

   A：一般地说，实验报告基因用于测试实验条件下基因的表达， 而另一个报告基因作为内对照，以提供实验报告基因测试的归一化。将实验报告基因的活力与内对照报告基因的活力作归一化可消除实验中不同测试间所固有的变化。 这些变化减弱实验准确度，其中包括培养细胞的数目及活力的差异，细胞转染及裂解的效率。海肾荧光素酶可用作对照报告基因及实验报告基因。在双荧光素酶报告基因测试中，将萤火虫荧光素酶作为实验报告基因，海肾荧光素酶作为对照报告基因。

   Question3：海肾荧光素酶与萤火虫荧光素酶相比的相对活性如何?

   A：在ATP、镁、氧存在时，萤火虫荧光素酶作用于甲虫荧光素，而来源于海洋腔肠(Renilla reniformis)的荧光素酶在氧的存在下作用于海肾荧光素。

   Question4：将两个报告基因载体作共转染应用什么条件?

   A：（1）当用双荧光素酶报告基因测试系统来测量等重量的萤火虫荧光素酶及海肾荧光素酶时，可观察到它们释放的光几乎相等。黄火虫荧光素酶的分子量为61 kD，而海肾荧光素酶的分子量为36 kD，当测试等重量的两个酶时，所测的海肾荧光素酶分子实际多69%。如以每摩尔为基础，据实验确定，用双荧光素酶报告基因试剂测试的莹火虫荧光素酶的荧光强度比海肾荧光素酶强大约53%。

   （2）共转染质粒所含启动子间的反式效应有可能会影响到报告基因的表达。

   （3）为体实验报告基因及对照报告基因的基因表达相对独立。每次实验时转染混和液中载体DNA的量及共转染报告基因载体的比例需作优化。可采用实验载体与共转染报告基因载体的组成比在10:1到50:1或更大的范围，这有利于抑制启动子间的交互作用。有时为有利于实验，共转染混和液中的实验载体应选择为少量部分。

   Question5：需用荧光测试仪对双荧光素酶报告基因测试系统的荧光素酶作测定吗?

   A：作DLR测试时应使用荧光测试仪，液闪仪的灵敏度相比太低，不易获得可重复的结果。

   Question6：被动裂解液能裂解培养的植物细胞吗？它能裂解哺乳动物组织所得的初级细胞吗？

   A：被动裂解液不能裂解植物细胞。它能裂解一些类型的哺乳初级细胞。一种细胞能否被它裂解需作测试。

   好了，好啦，关于双荧光素酶实验的常见问题与答疑我们就讲完啦，还有不懂的同学欢迎随时留言哦，需要视频教程的同学请点击：《双荧光素酶原理+实操》