周五好！今天普拉特泽跟大家一起来介绍一个新的实验——酵母单杂交实验。酵母单杂交技术是一种研究蛋白质和特定DNA序列相互作用的技术方法，普拉特泽生物分子检测平台为广大科研工作者提供酵母单杂实验外包服务，今天就跟大家一起来看看酵母单杂交的简单介绍！

  酵母单杂交技术最早是1993年由Li等从酵母双杂交技术发展而来，通过对报告基因的表型检测，分析DNA与蛋白之间的相互作用，以研究真核细胞内的基因表达调控。由于酵母单杂交方法检测特定转录因子与顺式作用元件专一性相互作用的敏感性和可靠性，现已被广泛用于克隆细胞中含量微弱的、用生化手段难以纯化的特定转录因子。

  酵母单杂交的基本操作过程主要包括：

  1、设计含目的基因(称为诱饵)和下游报告基因的质粒，并将其转入酵母细胞。

  2、将文库蛋白的编码基因片段与GAL4转录激活域融合表达的cDNA文库质粒转化人同一酵母中。

  3、若文库蛋白与目的基因相互作用，可通过报告基因的表达将文库蛋白的编码基因筛选出来。在这里作为诱饵的目的基因就是启动子DNA片段，文库基因所编码的蛋白就是启动子基因结合蛋白。

  酵母单杂交(Yeast one-hybrid)是根据DNA结合蛋白(即转录因子)与DNA顺式作用元件结合调控报告基因表达的原理，克隆与靶元件特异结合的转录因子基因(cDNA)的有效方法。其理论基础是：许多真核生物的转录激活子由物理和功能上独立的DNA结合区(DNA-binding domain BD)和转录激活区(Activation domain AD)组成，因此可构建各种基因与AD的融合表达载体，在酵母中表达为融合蛋白时，根据报道基因的表达情况，便能筛选出与靶元件有特异结合区域的蛋白。理论上，在单杂交检测中，任何靶元件都可被用于筛选一种与之有特异结合区域的蛋白。

  那么酵母双杂技术在现实验中有哪些用途呢？

  1、迄今为止，应用酵母单杂交体系已经识别并验证了许多与目的DNA序列结合的蛋白质，同时单杂交技术还被应用于识别金属反应结合因子。正向与反向单杂交体系的结合，还可用于筛选阻碍DNA与蛋白质相互作用的突变的单个核苷酸。

  2、目前，在研究DNA—蛋白质相互作用中，酵母单杂交体系主要有以下3种用途：①确定已知DNA—蛋白质之间是否存在相互作用;②分离结合于目的顺式调控元件或其他短DNA结合位点蛋白的新基因;③定位已经证实的具有相互作用的DNA结合蛋白的DNA结合结构域，以及准确定位与DNA结合的核苷酸序列。

  3、酵母单杂交是在酵母双杂交的基础上发展起来的技术，酵母单杂交主要用于研究蛋白质和DNA的相互作用，而酵母双杂交主要是用于研究蛋白质间的相互作用。

  在实际的应用中，酵母双杂也有一些无法避免的缺点，如：

  由于插入的靶元件与酵母内源转录激活因子可能发生相互作用，或插入的靶元件不需要转录激活因子就可以激活报告基因的转录，因此往往产生假阳性结果。如果酵母表达的AD融合蛋白对细胞有毒性，或融合蛋白在宿主细胞内不能稳定地表达，或融合蛋白发生错误折叠，或者不能定位于酵母细胞核内，以及融合的Gal4AD封闭了蛋白质上与DNA相互作用的位点，则都可能干扰AD融合蛋白结合于靶元件的能力，从而产生假阴性结果。

  酵母单杂技术的简单介绍我们就讲到这里啦，关于酵母双杂的见解、原理、流程、应用、缺点你都记住了吗？没记住没关系，我们帮您做，如果有酵母单杂实验外包或代做的需求，请选择为真实实验而生的普拉特泽~