大家好，这一篇我们要为大家讲解的就是蛋白标签（proteintag）

利用DNA体外重组技术，把标签蛋白与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，方便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断进步，科研人员陆续开发出了各种具有不同功能的蛋白标签。

目前，做体外重组蛋白表达系统的实验主要有四大类：原核表达系统、哺乳动物细胞表达、酵母表达系统及昆虫细胞表达。该实验大致步骤包括载体构建、表达鉴定和蛋白纯化。在构建载体阶段，除了载体上需要一些必要的表达元件，还需要考虑目的蛋白的密码子优化和蛋白标签的选择。选择合适的蛋白标签不但可以有利于蛋白的纯化，还能够促进蛋白的可溶性，但是同时也不能影响蛋白的结构功能和下游应用。小编详细介绍了四种蛋白纯化标签,方便小伙伴们进行实验设计。

蛋白纯化标签蛋白

6xHis-Tag

6xHis是由六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端，分子量不到0.84KD。

标签的分子量小，一般不影响目标蛋白的功能；

His标签本身特性对目的蛋白没有影响，不会形成二聚体；

His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究；

His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体；

可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；

可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签，用于多种蛋白表达系统。

碱基序列：

CATCATCATCATCATCAT

或

CACCACCACCACCACCAC

氨基酸序列：

HHHHHH

参考图谱

GST-Tag(谷胱甘肽巯基转移酶)

GST相对分子质量较大,约为26KD，插入在目的蛋白的C末端或N末端，大肠杆菌中常用在N端。GST蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶。一般选择GST标签的目的有两个，一是利用它提高外援蛋白表达的可溶性；二是提高蛋白的表达量。

纯化：GST标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶(Glutathione sepharose)亲和树脂进行纯化。蛋白表达纯化结束后需根据不同的蛋白应用而确定是否切除标签，标签较大，切除与否需根据下游应用考虑。如果要去除GST融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。检测方法可用GST抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。

参考图谱

MBP-Tag(麦芽糖结合蛋白)

MBP残基数346，分子量42.5KDa，大肠杆菌K12的malE基因编码，在N端构建，可以用来提高可溶性(尤其是真核蛋白)。麦芽糖结合蛋白作为标签蛋白可以减少目的蛋白的降解，提高表达产物的水溶性，也为以后对目的蛋白的纯化提供了基础。

麦芽糖结合蛋白能够被多糖树脂吸附，因此在过柱时，能够使融合蛋白与其它蛋白成份分离。如果要去除MBP融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。检测方法可用MBP抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。

参考图谱

SUMO (小泛素相关修饰物/Small ubiquitin-like modifier)

SUMO标签蛋白是一种小分子泛素相关修饰蛋白，是存在于真核生物中高度保守的参与蛋白质小泛素化相关修饰的一类大蛋白。与GST和MBP相比, SUMO不仅可以作为重组蛋白表达的融合标签还具备分子伴侣的功能，能促进蛋白的正确折叠，提高重组蛋白的可溶性功能，对热和蛋白酶具有耐受性，更有助于保持目的蛋白的稳定性。

此外，SUMO标签有着与其配套的蛋白酶(专一性强)，此蛋白酶识别的是SUMO的三级结构，切割的特异性极高，不存在任何氨基酸的残留，可以完整地切除标签蛋白，得到天然蛋白，因此适用于重组蛋白表达。

参考图谱

蛋白纯化标签的内容就先讲到这里

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【质粒介绍】分解篇4-蛋白检测标签

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