首页 > 技术文章 > 【质粒介绍】分解篇4-蛋白检测标签

【质粒介绍】分解篇4-蛋白检测标签

2021-08-25 11:35:42

来源/作者:普拉特泽生物-医学整体课题外包

这一篇为大家讲解的是蛋白标签(protein tag)中的蛋白检测标签。


分子生物学经常用到蛋白标签,因为在检测过程中,经常碰到目的蛋白的抗体不易买到的情况,这时使用相应的蛋白标签可以方便达到检测的效果,常用的蛋白标签主要有以下几个。

1.png


7.png




Flag标签蛋白

8个氨基酸的亲水性多肽编码的蛋白,同时载体中构建的Kozak序列使得带有Flag的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。Flag作为标签蛋白,其融合表达目的蛋白后具有以下优点:

Flag作为融合表达标签,其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质,这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。

融合Flag的目的蛋白,可以直接通过Flag进行亲和层析,此层析为非变性纯化,可以纯化有活性的融合蛋白,并且纯化效率高。

Flag作为标签蛋白,其可以被抗Flag的抗体识别,这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有Flag的融合蛋白进行检测、鉴定。

融合在N端的Flag,其可以被肠激酶切除(DDDK),从而得到特异的目的蛋白。因此现Flag标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。


参考图谱

2.png


HA标签蛋白

源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇,含有高比例的带电残基的9个氨基酸,对外源靶蛋白的空间结构影响小, 容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端。易于用Anti-HA抗体检测和ELISA检测。


参考图谱

3.png


c-Myc标签蛋白

一个含11个氨基酸的小标签,意味着它不太可能干扰蛋白质折叠,可置于蛋白质的N端和C端。C-Myc tag已成功应用在 Western-Blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中, 可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。


参考图谱


4.png


V5标签

来源于副粘病毒SVP/V蛋白的95-108位氨基酸。


HSV标签(单纯疱疹病毒)

来源于糖蛋白D前体包膜蛋白并且短,所以它不太可能干扰蛋白质结构或功能。


看完了吗?

5.png

好,那么这两篇

蛋白纯化标签与蛋白检测标签的内容

就先讲到这里

下一周将发布

【质粒介绍】系列的最后两篇:

【质粒介绍】分解篇5-蛋白荧光标签

【质粒介绍】分解篇6-载体推荐

记得关注噢!



6.png