大家好，今天带大家来认识一个新的实验——Northern Blot印迹杂交实验，考虑到上期出了Western Blot之后总有小姐姐来向小编咨询Northern Blot的各种实验问题，居然还有朋友连概念都是模糊的，那小编当然是即刻给安排上啦！Northern Blot实验介绍由普拉特泽生物分子检测平台给大家总结分享，普拉特则专业提供Northern Blot外包实验服务，分子检测平台成立以来承接了Northern Blot业务几百次，积累了极其丰富实验操作经验，快来学习吧！

图片来源《Feedback inhibition of L1 and alu retrotransposition through altered double strand break repair kinetics》

       Northern印迹杂交（Northern blot）。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。DNA印迹技术由Southern于1975年创建，称为Southern印迹技术，RNA印迹技术正好与DNA相对应，故被称为Northern印迹杂交，与此原理相似的蛋白质印迹技术则被称为Western blot。（链接奉上快去学习）

       Northern Blot印迹杂交的实验原理是：整合到植物染色体上的外源基因如果能正常表达，则转化植株细胞内有其转录产物——特异mRNA的生成。将提取的植物总RNA或mRNA用变性凝胶电泳分离，则不同的RNA分子将按分子质量大小依次排布在凝胶上；将他们原位转移到固定膜上；在适宜的离子强度及温度条件下，用探针与膜杂交；然后通过探针的标记性质检测出杂交体。若经杂交，样品无杂交带出现，表明外源基因已经整合到植物细胞染色体上，但在该取材部位及生理状态下该基因并未有效表达。

       Northernblot的优势在于它可检测目的片段的大小、是否具有可变剪切出现、可允许探针的部分不配对性，杂交过后的膜经过一定的处理除去探针后还可保存很长时间再次杂交使用。

       那么为什么northern见的比较少呢？

       因为实验需要的RNA量比较大，对一些少量和痕量样品是很难实现的，因此很多实验都做反转录后的定量分析。但事实上除了无法给出realtimePCR那种量化数据外（realtimePCR，尤其是间接法的，做过的人应该有个概念吧，你标准曲线稍微偏一点点，结果就有倒过来的可能），Northern的结果才是最为直接，最可信的结果，因为cDNA的定量经过了反转录这一步，由于多了一步操作因而也多了一步不确定的因素，而且由于检测的靶由RNA调到了DNA，做PCR和杂交时结果也就会受到genomicDNA的影响（reverse-Northernblot和RT都一样），另外在杂交实验中，DNA-RNA，RNA-RNA这两种杂交双链的稳定性是比DNA-DNA稳定和严格的多的，因此不管是DNA探针还是RNA探针，检测RNA靶要比检测DNA靶在严谨性上要高很多。因此Northern Blot在材料和技术上的问题没办法做，所以在通过反转录做cDNA。

       好啦，那么关于Northern Blot印迹杂交实验我们就介绍到这里啦！还有需要补充的或者更多不了解的直接给客服留言问题和联系方式，技术小姐姐会一个个耐心解答哦！当然有Northern Blot外包或代做的需求也可以随时留言哦！