脑缺血模型/缺血再灌注模型实验步骤由普拉特泽生物为大家总结分享，欢迎留言指正。目前，脑缺血模型普遍采用国际上广泛认可的大脑中动脉栓塞模型（MCAO），其发病机理与人类缺血性脑卒中表现相似，对于制作模拟人脑缺血模型对脑缺血发病机制及药物筛选有重要意义。普拉特泽生物动物实验平台专业为科研人员提供脑缺血动物模型外包与代做服务，希望能为广大科研人员提供科研道路上的一点帮助。

        本文就来跟大家分享，大脑中动脉栓塞模型（MCAO）的详细造模介绍与步骤：

        一般采用雄性SD大鼠即可，手术成功率也比较高，小鼠也是可行的，但是栓线的型号和进入的深度不同）。考虑大鼠雌激素水平对脑缺血损伤可能的神经保护机制及激素水平的生理性波动对大鼠情绪的影响，采用血管解剖结构更为清晰的雄性SD大鼠作为MCAO的动物模型。大鼠大脑中动脉的长度和粗细与其体重形成正比，目前多主张大鼠体重控制在250-300g。

        一、实验准备

        1、样本准备：6-8周雄性SD大鼠12只

        2、实验分组：Sham组3只；再灌注6H组3只；再灌注24H组3只；再灌注48H组3只

        3、实验器材准备：手术剪、手术镊、线栓、缝合针、缝合线、棉线

        二、脑缺血造模实验操作步骤

        1、术前12小时大鼠禁食，自由进水。

        2、3 %戊巴比妥钠按60 mg/kg剂量由腹腔注射进行麻醉。

        3、待大鼠麻醉后采取仰卧位固定于操作台。

        4、于颈正中作一纵向切口，仔细分离肌肉，暴露出右侧颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉。

        5、小心分离血管周围的神经组织，用棉线在颈外动脉的远心端做永久结扎，在颈总动脉近心端和颈内动脉做临时结扎。

        6、自颈外动脉远心端剪开一个小口，将线栓从颈外动脉经过颈总动脉送入颈内动脉，当线栓上的黑色标志刚过颈总动脉的分叉口显示在颈内动脉处时，停止下送线栓。

        7、将线栓连同颈外动脉一起临时结扎，缺血2 H后将线栓拔出颈内动脉（不要完全拔出），松开颈总动脉的临时结扎恢复供血。

        8、再灌注6/24/48 H后处死大鼠，将脑组织取出后分成6份，1份冻存备用，其余5份进行TTC染色。

        9、Sham组大鼠进行颈部皮肤切开与血管分离后不做下线栓处理，直接缝合。

        三、脑缺血造模实验注意事项

        1、栓线的直径和线头是否光滑？

        因为它直接关系到进线的难度和手术时间。栓线直径必须要考虑到动物的体重，不同体重的动物进线深度不同。所以保证动物体重基本一致，提前做预实验确定进线深度是非常有必要的。

        2、栓线不可过硬。

        过硬线栓容易找手感，但是容易出现刺破蛛网膜下腔血管，导致颅内出血。同时过硬线栓还会改变血管自然形态，当线栓插入血管以后，因为线栓过硬，血管肌张力无法使得线栓改变形态，只能被线栓改变形态，导致血管处于紧绷状态，对于再灌注操作不利。

        3、栓线插入深度？

        许多文献报道插入深度为18.5±0.5mm（270g左右大鼠），具体的长度需根据实验的实际操作进行调整，18.5mm并不是标准。总之，以遇到轻微的阻力为准，此时栓线正好进入颅内的大脑前动脉，阻塞大脑中动脉的开口。建议当插线近18mm（做上标记）时，注意手的感觉，轻缓推进，直至感觉到阻力为止（当遇到阻力后，再插线会见到线弯曲）

        4、不同亚型鼠，如Wistar大鼠、F344大鼠或SD大鼠，它们的脑血管解剖和缺血敏感性不同。同样的操作，Wistar大鼠脑梗死面积较小，F344大鼠脑梗死面积最大，SD大鼠居中。因此，正式试验前确定好大鼠种类也是比较重要的。

        5、血糖浓度高或低均可加重脑损伤，增加梗死面积，加重脑水肿，增大梗死后出血率。因此有必要监测和报告血糖指标。实验前12h～24h动物禁食是防止血糖升高的有效手段。

        6、最好能够实时观测颅脑血流情况。这样可以准确判断线栓是否阻塞 MCA，一旦血流灌注量下降超过70%，即代表线栓阻塞MCA。

        那最常用的MCAO模型我们就讲完啦，和你的操作步骤有没有什么不同的呢？有任何不懂的问题欢迎随时留言给技术为您答疑解惑。如果您有脑缺血模型外包代做的需求欢迎选择普拉特泽生物~

——关于我们——

        普拉特泽自建3000平米的GMP级实验室
拥有七个大型实验平台、硕博士学历技术团队100余人
病理实验平台、动物实验平台、流式检测平台、分子检测中心、细胞病毒中心,三大资源库（细胞、组织、质粒）
秉承“死磕真实实验”学术精神提供各项优质实验服务
欢迎您交流咨询