大家好，今天普拉特泽带大家一起学习的是耐药细胞株的构建步骤，肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性是肿瘤治疗失败的重要因素之一，耐药细胞株的构建是探索肿瘤细胞产生耐药的原因及改善的重要方法。普拉特泽生物工具平台承接大量的生物医学科研人员研究用耐药细胞株构建服务，为广大攻克肿瘤治疗的实验人员提供技术上的帮助，耐药细胞株构建，就找普拉特泽~

        一种药物长期作用于某类细胞，杀死其中没有抗性的细胞，而对这类细胞中具有抗性的细胞不能杀死，即进行了选择。具有抗性的细胞大量繁殖产生很多抗性后代，但再用这种药物时表现出的药效大大下降的现象就是细胞的耐药性，采用体外低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击方法诱导肿瘤细胞对特定药物产生耐药性，从而构建出对特定药物产生耐药性的肿瘤细胞株。

        现在我们就来看看，耐药细胞株的详细构建的详细操作步骤？（以阿帕替尼耐药株为例）：

        1、细胞复苏

        (1) 将ddH₂O预温至37℃。

        (2) 戴上手套和口罩帽子，从液氮罐中取出装有目的细胞的冻存管（内有1 mL细胞混合液），立即投入37℃ ddH₂O中，轻摇冻存管使之在1分钟内快速溶解。

        (3) 完全溶解后，75%酒精擦拭冻存管外壁消毒后带进超净台。

        (4) 在超净台中，在15 mL灭菌离心管中预先加入10 mL新鲜配制的培养基，打开冻存管，将所有冻融的细胞悬液加入该离心管中，常温1000 rpm离心3分钟，吸除上层的培养液。

        (5) 1mL培养基重悬细胞沉淀，轻轻吹打混匀后加入T25细胞培养瓶中，补足培养基至5 mL，置于37℃、5% CO₂培养箱培养。

        (6) 48小时后换液，细胞融合接近80%时即可传代。

        2、细胞给药+培养

        HSC-3细胞用含10%胎牛血清、1%双抗的DMEM培养基，在37℃饱和湿度、含5% CO₂的培养箱中培养。

        3、细胞处理

        向细胞中加入10.36μg/mL阿帕替尼进行处理，至筛选出可以在含有10.36μg/mL阿帕替尼的培养基中稳定传代的细胞。

        好啦，那关于耐药细胞株构建的实验步骤小编就介绍到这里啦，如果和您的操作步骤不一样欢迎随时联系我们，可以和咱们实验的技术交流探讨的。如果您有耐药细胞株构建外包的需求，欢迎随时联系~