酵母杂交常见问题试剂篇由普拉特泽生物技术为大家总结分享，酵母杂交是可以体外研究蛋白与DNA、蛋白与蛋白相互作用的技术方法，也是普拉特泽生物分子检测平台的常规实验之一，技术在承接的上百例酵母杂交实验外包服务中积累了大量的经验，今天就把我们在实验过程中遇到的和大家经常提到的技术问题都分享给大家，快点做笔记吧！

        问题一：经典转化试剂盒和Super转化试剂盒是否需要准备其它试剂？

        答：需要准备DMSO，无菌水或者无菌生理盐水，无需其它试剂。

        问题二：50% PEG3350溶液是否可以高压灭菌？

        答：经过Coolaber检测，PEG3350高压灭菌可以用于酵母转化，但过滤除菌的PEG有更高的转化效率。高压灭菌可能会导致PEG分子量或浓度发生变化，从而影响转化效率。建议选择过滤除菌PEG溶液。

        问题三：50% PEG溶液过滤除菌太慢是否正常？

        答：50% PEG粘稠，针头滤器过滤太慢，可选用大面积的真空抽滤设备除菌。

        问题四：Carrier DNA是否需要预变性处理以及处理方法？

        答：Coolaber的Carrier DNA已经做过变性处理。基于保证转化效率的目的，产品使用前可以再次变性处理。建议分装至PCR管内，于PCR仪（设置98℃ 10 min，4℃ 2 min）处理后冷冻保存。变性Carrier DNA可以反复冻融三次，超过三次需要再次变性处理。

        问题五：Carrier DNA是否可以由鲑鱼精DNA制备以及制备方法？

        答：可以。但是制备方法复杂，需要溶解，剪切并测定分子量大小，制备方法参照分子克隆。

        问题六：YPD Plus Liquid Medium的作用是什么？

        答：YPD Plus Liquid Medium用于酵母转化后的复苏培养，经Coolaber检测，在增加复苏培养步骤后，转化子的数量可以增加50%-100%，在文库转化中作用明显。但在互作验证或单个质粒转化实验中，经典转化Kit或Super转化Kit的转化效率完全可以满足实验要求。YPD plus营养丰富，极易污染，产品包装为4×25 mL形式，长期不用请置于-20℃保存。

        问题七：酵母转化PEG/LiAC混合液的成分和用途？

        答：酵母转化PEG/LiAC混合液（CAT：YT0006）由50% PEG、1M LiAC、10×TE按照8:1:1组成。按照每100 μL感受态细胞加入500 μL混合液进行转化反应，具体方法可以参照Coolaber酿酒酵母感受态细胞的使用说明。

        问题八：1×TE/LiAC混合液（即用型）的成分和用途？

        答：1×TE/LiAC混合液（即用型，CAT：YT0009）与通常说的1.1×TE/LiAc浓度一致，成分为110 mM LiAC及1.1×TE。主要用于制备酵母感受态细胞，具体可以参照SK2400或SK2401的使用说明。

        问题九：菌落转化Kit（SK2390）在什么情况下可以使用？

        答：菌落转化Kit可以满足大多数单个或者两个载体转化的实验，在菌落数满足要求的条件下，每μg质粒转化后会得到50个以上的转化子。

        好啦，关于酵母双杂实验常见问题试剂篇我们就解释道这里啦，如果您还有其他的问题可以看看上篇的《酵母杂交实验——转化篇》，有酵母杂交实验外包需求的老师欢迎直接留言，普拉特泽技术会第一时间回复到您！

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