大家好，今天普拉特泽生物带大家学习的是——酵母双杂交实验的注意事项。酵母双杂是可以直接在细胞外检测蛋白质交互作用的方法，也是普拉特泽生物分子检测平台的常规实验之一。普拉特泽分子检测平台专业代做酵母双杂实验，积累了大量的实操经验与理论，今天就把我们在实验中总结的所有注意事项全部分享给大家！

        1、如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的，该怎么办？

        在某些情况下，在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1mL的SD/–Trp，接着将重悬液平铺于5个100-mm的SD/–Trp平板，在30℃下温浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用5mL0.5XYPDA刮下每块板上的克隆，并收集到一管中，这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应。

        2、如果诱饵蛋白存在自激活，该如何处理？

        该蛋白很可能带有完整的AD区和BD区，是个完整的转录因子，可以将转录因子基因分成两部分分别进行文库筛选，然后重新检测其是否自激活，但要注意切割也有可能破坏蛋白之间的相互作用。

        3、转化效率太低怎么办？

        1) 检测感受态细胞效率，标准操作规范。 2) 注意质粒使用量，检查仪器状态。 3) 重新配制新鲜培养基，并做对照转化。

        4、如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的，该怎么办？

        在某些情况下，在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆 1mL 的 SD/–Trp，接着将重悬液平铺于 5 个 100-mm 的 SD/–Trp 平板，在 30下温浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用 5mL 0.5X YPDA 刮下每块板上的克隆，并收集到一管中，这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应。

        5、杂交效率不高，该如何处理？

        在杂交中，预转化的诱饵细胞的数量可能不够。当对诱饵菌株进行液体培养过夜时，应挑选大的、新鲜的克隆进行培养，经过离心和重悬后，再使用血球计对细胞进行计数。密度应该在 1 x 109/mL。 一个甚至两个融合蛋白对酵母细胞有毒。你可以通过重组方法来减轻毒性，同时又能保证蛋白的相互作用。或者使用表达水平较低的载体。也可以在琼脂平板或滤膜上进行杂交。但同时必须作杂交对照实验。

        好啦，那关于酵母双杂实验操作的注意事项我们就先总结到这里啦，如果您也对酵母双杂技术感兴趣，或者正准备做酵母双杂交实验的话，可以同时根据本文和上篇的酵母双杂操作步骤一起参考设计步骤和实验。如果需要的酵母双杂外包的话，可以直接给客服留言，普拉特泽生物当仁不让~