细胞死亡根据其起源、性质及生物学意义区分为凋亡、坏死两种类型。

细胞凋亡普遍存在于生命界，它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合，是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程，具有可鉴别的形态学和生物化学特征。

细胞坏死是细胞处于剧烈损伤条件下发生的细胞死亡。

温和损伤刺激及抗肿瘤药物等因素在诱导细胞凋亡的同时，也可产生细胞坏死，这取决于损伤的剧烈程度和细胞本身对刺激的敏感程度。

细胞凋亡方法汇总检测

1. Hoechst33342和碘化丙啶（propidium iodide，PI）荧光探针双标记法

作用原理：当细胞坏死时，质膜不完整，PI就进入细胞内部，它可嵌入到DNA或RNA中，使坏死细胞着色（红色），凋亡细胞和活细胞不着色。Hoechst33342是一种亲脂性活性荧光染料且毒性较弱的双苯并咪唑衍生物，可跨膜进入活细胞与DNA特异结合（主要结合于A-T）碱基区），显示活细胞（蓝色）。凡是看到有凋亡小体的细胞都是凋亡细胞。

因此，用Hoechst33342和碘化丙啶（propidium iodide，PI）对细胞进行双重染色，可以区别凋亡、坏死及正常细胞。

实验结果显示如下：

2. Annexin V/PI双染色法

作用原理：磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中(下图)。

Annexin-V是一种分子量为35~36 KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素（FITC、PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针标记，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生（绿色）。

碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染（红色）。因此将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。

实验结果显示如下：

荧光显微镜检测（Annexin-V绿色、红色PI）

流式细胞仪检测

3. TUNEL法

作用原理：脱氧核糖核苷酸衍生物地高辛[（digoxigenin）-11-dUTP]在TdT酶的作用下，可以掺入到凋亡细胞双链或单链DNA的3-OH末端，与dATP形成异多聚体，并可与连接了报告酶（过氧化物酶或碱性磷酸酶）的抗地高辛抗体结合。在适合底物存在下，过氧化物酶可产生很强的颜色反应，特异准确的定位出正在凋亡的细胞，因而可在普通光学显微镜下进行观察。

实验结果显示如下：

4. Caspase-3活性检测法

作用原理：Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活性明显下降。

Western blot 法分析Procaspase-3的活化，以及活化的Caspase-3及对底物多聚（ADP-核糖）聚合酶[poly（ADP-ribose）polymerase，PARP]等的裂解。

流式细胞术分析收获细胞正常或凋亡细胞→PBS洗涤→加Ac-DEVD-AMC→37°C反应1 h→UV流式细胞计分析caspase-3阳性细胞数和平均荧光强度。

实验结果显示如下：

Western blot 法

流式检测法

5. 形态学检测法

根据凋亡细胞固有的形态特征，使用透射电镜检测凋亡细胞形态变化。

凋亡细胞体积变小，细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei）的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象（cavitations）的空泡结构(图2)；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。

实验结果显示如下：

以上就是关于

检测细胞凋亡方法汇总

是不是已经帮您解答清楚了呢？

想学习更多的实验知识欢迎关注我们的春风学院视频学习哦

http://weike.fm/zIP4x4fffd

详请咨询客服：18570028002（小桃子）