大家好，今天跟大家一起学习的是HE染色实验操作步骤。HE染色是石蜡切片技术里常用的染色法之一，普拉特泽生物病理实验平台承接最多、最普遍的实验，也是我们实验室技术操作最多，最熟练的染色技术之一。本文我们就一起来看看，HE染色到底怎样操作才能得到一个漂亮的染色结果。

        一、实验试剂材料

        多聚甲醛、酒精、二甲苯、石蜡、苏木精水溶液、伊红染色液、生理盐水、蒸馏水、PBS等实验必备溶剂

        二、实验步骤

        （1）HE染色组织固定与切片：首先将组织样本进行常规的石蜡包埋。在模具中加入液态石蜡，将待包埋的组织样本放入石蜡中，确保组织位置规整。补充少许液态的石蜡后，进行降温冷冻，使石蜡变为固态达到组织固定的效果，然后使用石蜡切片机进行切片，厚度在4-8um左右。将切完后的组织切片放入载玻片上使用40℃温水浸泡使组织充分伸展。

        （2）HE染色样本脱蜡：将待测组织样本切片放于二甲苯中，充分浸泡10 min，浸泡完后更换二甲苯继续浸泡10 min，目的是使用二甲苯将切片中的石蜡溶解，这样可以在进行染液染色的时候，染液可以充分进入组织中，同时，二甲苯还可以起到透明的作用，使切片更容易观察。

        （3）HE染色样本水化：将浸泡过二甲苯的待测组织样本先放入无水乙醇中浸泡5min，使脱蜡时用的二甲苯可以被洗脱出去，使水可以进入组织中；再依次置于95%、85%、70%乙醇中各浸泡5 min以达到充分水化的效果。

        （4）HE染色切片苏木素染色、分化与反蓝：将水化后的组织样本的切片使用PBS溶液浸泡清洗，每次浸泡5 min，总共清洗3次。之后用移液枪吸取已经预先配制好的苏木素染色液，每个组织切片滴加100 ul，充分染色10 min。染色完毕后使用蒸馏水洗去多余的苏木素染色液。然后再使用1%的盐酸乙醇进行分化，使细胞核中结合过多的染液和细胞浆中的多余的染液被除去。分化完成后，再用双蒸水将组织切片冲洗干净。为了使苏木素染蓝色，使用弱碱性的促蓝液加入组织切片中，让细胞核染蓝色。反蓝结束后先用清水进行清洗，再用双蒸水将组织切片冲洗干净。

        （5）HE染色切片伊红染色与脱水：向上一步驟的组织样本切片中加入伊红染液，并使组织可以充分染色3 min，染色完毕后，再将组织切片进行梯度脱水，分别使用浓度为80%、95%以及无水乙醇进行操作。80%的乙醇脱水5s，95%乙醇脱水2 min，无水乙醇脱水2 min。

        （6）HE染色样本切片风干封片：将脱水后的组织样本切片使用二甲苯浸泡2次，每次持续4 min，然后将组织样本切片干，并使用中性树胶封片。

        （7）最后在显微镜下观察并拍照

        好咧，那关于HE染色的操作步骤就讲解完啦，不懂的点击《HE染色理论+实操》学习，还有其他疑问的话欢迎留言，技术会耐心回复的哦。如果您需要HE染色外包或HE染色代做服务，普拉特泽生物随时在线~