非酒精性脂肪性肝炎（NASH）是NAFLD的进展阶段，表现为肝脏脂肪变性、炎症和纤维化。在NASH小鼠模型研究中，肝重比（Liver/Body Weight Ratio）、血清ALT（丙氨酸氨基转移酶）、肝脏TG（甘油三酯）是评估疾病进展的核心指标。

——非酒精性脂肪肝（NASH）小鼠模型关键指标检测指南由普拉特泽生物动物实验平台为大家总结分享。普拉特泽生物为广大科研人员提供长期稳定的非酒精性脂肪肝小鼠模型外包实验服务——本文将详细介绍这些指标的检测原理、实验步骤及常见问题解决方案，帮助科研人员获得准确、可重复的数据。

1. 肝重比（Liver/Body Weight Ratio）检测

意义：评估肝脏肿大程度，反映脂肪沉积和炎症程度。

实验步骤

●小鼠称重：禁食4-6小时后，称量小鼠体重（g）。

●肝脏摘取：安乐死后迅速取出完整肝脏，用预冷PBS冲洗血迹，滤纸吸干表面水分。

●称肝重：精确称量肝脏湿重（g）。

计算肝重比：

注意事项

✔标准化操作：所有小鼠禁食时间一致，避免食物影响肝脏重量。

✔ 快速取材：肝脏离体后易失水，需在10分钟内完成称重。

✔排除异常样本：若肝脏有肉眼可见肿瘤或严重坏死，需记录并剔除。

2. 血清ALT（丙氨酸氨基转移酶）检测

意义：ALT是肝损伤的关键标志物，NASH模型中ALT升高提示肝细胞损伤。

●实验方法

（1）采血与血清制备

眼眶取血/心脏穿刺：收集全血至EP管，室温静置30分钟。

离心分离血清：4℃、3000 rpm离心15分钟，取上清（避免溶血）。

（2）ALT检测（推荐试剂盒法）

原理：ALT催化丙氨酸和α-酮戊二酸反应生成丙酮酸，通过检测NADH吸光度变化（340 nm）计算酶活性。

步骤：按试剂盒（如碧云天ALT检测试剂盒）说明书操作，通常包括：
1.配制反应混合液

2.加入血清样本

3.酶标仪测定OD值

4.根据标准曲线计算ALT浓度（U/L）

常见问题与优化

溶血影响：红细胞破裂会释放ALT，导致假阳性，需轻柔操作避免溶血。

样本保存：血清4℃可存24小时，-80℃长期保存（避免反复冻融）。

3. 肝脏TG（甘油三酯）检测

意义：TG沉积是NASH的核心特征，定量TG可评估脂肪变性程度。

✔实验流程

（1）肝脏样本处理

组织匀浆：取50-100 mg肝组织，加入1 mL异丙醇（或氯仿:甲醇=2:1），匀浆器冰上破碎。

离心提取脂质：12,000 rpm、4℃离心10分钟，取上清。

（2）TG测定（推荐GPO-PAP法）

原理：甘油三酯被脂蛋白脂肪酶水解为甘油，经酶偶联反应生成醌亚胺，在546 nm测吸光度。

步骤（以南京建成试剂盒为例）：

配制工作液

①加入样本和标准品

②37℃孵育10分钟

③酶标仪检测，计算TG含量（mmol/g蛋白或mg/g组织）

关键注意事项

⒈标准化取样：同一肝叶位置（如左叶）取样，避免区域差异。

⒉校正总蛋白：建议用BCA法测匀浆总蛋白，以mmol/mg蛋白为单位更准确。

4. 数据解读与NASH模型验证

⒈肝重比：NASH小鼠通常＞5%（正常小鼠约4%）。

⒉ALT：NASH模型ALT＞50 U/L（正常＜30 U/L）。

⒊TG：高脂饮食模型TG可达正常肝的3-5倍。

建议结合其他指标：

组织学（HE染色观察脂肪变性、天狼星红染色评估纤维化）

炎症因子（TNF-α、IL-6 ELISA）

5. 实验优化与FAQ

 Q：ALT检测为何要用空腹血清？

→ A：进食后脂血可能干扰吸光度检测。

 Q：TG提取用异丙醇还是氯仿-甲醇？

→ A：异丙醇更安全，但氯仿-甲醇提取效率更高（需通风橱操作）。

 Q：肝重比异常高可能原因？

→ A：除脂肪沉积外，需排除肝脏充血、肿瘤或采样误差。

好啦，非酒精性脂肪肝（NASH）小鼠模型关键指标检测指南我们就简单介绍到这里啦，同学们有没有一个简单的了解呢？不懂得可以给客服留言技术给您详细解答。下一篇再详细为非酒精性脂肪肝NAFLD模型常见问题及解决方案，普拉特泽生物誓让大家透彻非酒精性脂肪肝（NASH）小鼠模型的检测过程。当然您有动物实验方法或其他医学科研实验外包的需求，欢迎随时咨询哦