大家好！今天普拉特泽生物跟大家一起学习的是DNA提取的实验步骤。DNA全称是脱氧核糖核酸，是生物细胞内含有的四种生物大分子之一核酸的一种。普拉特泽生物分子检测平台为大家提供各种分子检测外包实验，积累了大量实操经验，本文就跟大家分享分子生物学研究的主要对象——动物组织DNA的提取步骤。

 
        DNA 是遗传信息的载体，是分子生物学研究的主要对象，为了进行测序、杂交、基因表达、文库构建等实验，获得高分子量和高纯度的基因组 DNA是非常重要的前提，因此基因组 DNA 的提取也是分子生物学试验技术中最重要、最基本的操作之一。

        一、动物组织DNA提取设备准备

        1、材料：动物组织

        2、试剂：TIANGEN 血液/细胞/组织基因组 DNA 提取试剂盒，无水乙醇等

        3、设备：离心机，微量移液器等

        二、动物组织DNA提取步骤

        1、处理材料：取动物组织 10 mg，尽量切碎，加 200 μL 缓冲液 GA，振荡至彻底悬浮。

        2、加入 20 μL 蛋白酶 K 溶液，混匀后 56℃水浴，直至组织溶解（不同组织裂解时间不同，通常需 1-3 小时即可完成）。简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。

        3、加入 200 μL 缓冲液 GB，充分颠倒混匀，70℃放置 10 分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁水珠。（溶解 DNA）

        注意：加入缓冲液 GB 时可能会产生白色沉淀，一般 70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取 DNA 量少和提取出的 DNA不纯。

        4、加入 200 μL无水乙醇，充分振荡混匀 15 s，此时可能出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。（沉淀 DNA）

        5、将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱 CB3 中，吸附柱放入收集管中，12,000rpm（～13,400×g）离心 30s，倒掉废液，将吸附柱 CB3 放回收集管中。（吸附沉淀）

        6、向吸附柱 CB3 中加入 500 μL缓冲液 GD （使用前先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm（～13,400×g）离心 30s，倒掉废液，将吸附柱 CB3 放回收集管中。

        7、 向吸附柱CB3 中加入700 μL漂洗液PW （使用前先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm（～13,400×g）离心 30 s，倒掉废液，将吸附柱 CB3 放回收集管中。

        8、向吸附柱 CB3 中加入 500 μL漂洗液 PW，12,000 rpm（～13,400×g）离心 30s，倒掉废液。（6、7、8 为漂洗）

        9、将吸附柱 CB3 放回收集管中，12,000 rpm（～13,400×g）离心 2 min，倒掉废液。将吸附柱 CB3 置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

        注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的 PCR 等实验。

        10、将吸附柱 CB3 转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200 μL洗脱缓冲液 TE，室温放置 2-5 min，12,000  rpm（～13,400L×g）离心 2 min，将溶液收集到离心管中。（溶解洗脱 DNA）

        注意：采用硅基质膜吸附的 DNA，可将 DNA 在低盐高 pH 值条件下洗脱下来。pH 值在7.0-8.5 之间洗脱效率较高，pH 值低于7.0 则洗脱效率很低。

        洗脱缓冲液体积不应该少于 50μL，体积过小影响回收效率。为增加基因组 DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱 CB3 中，室温放置2 min， 12,000 rpm（～13,400×g）离心 2  min。DNA 产物应保存在-20℃，以防止 DNA 降解。

        好啦，那关于动物组织样本中的DNA提取步骤咱们就说到这里啦，如果您也对分子实验感兴趣的话可以直接留言，跟普拉特泽生物的技术一起讨论动物组织样本DNA样本最优的提取步骤~