内参就是内部参照，一般是指管家基因编码表达的蛋白，它们在各个组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照参。内参则可以校正蛋白质定量、上样过程中存在的误差，保证实验结果的准确性。

此外，内参可以作为空白对照，还可以检测蛋白转膜情况是否完全、整个WB显色发光体系是否正常。内参抗体种类很多，比如β-Actin、β-Tubulin、GAPDH等，下面简单介绍下如何选择内参。

选择内参抗体时，应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KDa以上。比如检测目的蛋白分子量为45KDa，此时不适宜选择β-actin（42KDa）作为内参，可以考虑选择GAPDH（36KDa）作为内参。

不同种属的样本内参蛋白不同。

如哺乳动物的组织或者细胞样本，通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH；植物来源实验样本，则可以选择Plant actin、Rubisco等。

不同表达部位内参蛋白不同

内参的选择还需要考虑实际的实验环境和样品的前处理。在某些特殊条件下，一些内参蛋白的表达也不是绝对稳定的，会发生变化，也就是我们常说的，内参不齐。

下面我们来看下不同内参的适用环境：

【Actin】肌动蛋白，是细胞的一种重要骨架蛋白。Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，其余两种广泛分布于各种组织中，包括 β-actin和γ-non-muscle actin。β-actin广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富，其含量占所有细胞总蛋白的50%。但是在一些少量特殊的情况下，如脂肪组织，β-actin的表达量就很少，此时β-Actin就不再适用于这些样本的内参。

【Tubulin】微管蛋白，是细胞的一种骨架蛋白。Tubulin分为α、β、γ、δ、ε等多种tubulin，其中α-Tubulin和β-Tubulin可以形成异源二聚体，是形成微管的最主要的两种Tubulin。α-tubulin和β-tubulin分子量分别为55kDa和50kDa，其实际检测条带均在55kDa左右。作为内参，β-tubulin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于WB时上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染色观察细胞的微管结构。

【GAPDH】甘油醛-3-磷酸脱氢酶，是参与糖酵解的一种关键酶，催化糖酵解的第六步,它还参与核转录等事件,核糖核酸转录、DNA复制和修复以及细胞凋亡。由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作WB的内参。在某些生理因素，如缺氧和糖尿病，会增加GAPDH在特定的细胞和组织的表达，如出现这类的样品，尽量避免选择GAPDH作为内参。

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以前怕写得不好，不好意思要关注，现在不一样了，现在脸皮厚了