上一篇给大家介绍了研究细胞迁移时应用最广泛的检测方法之一一细胞划痕实验，今天我们介绍另一种同样是应用最为广泛的方法之一―Transwell小室实验。

一、Transwell小室实验原理

1、Transwell-迁移实验：Transwell小室上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。

2、Transwell-侵袭实验：在Transwell上室膜上铺上一层基质胶，会形成一层膜结构，与天然的基质膜的结构极为相似；上室种细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，细胞不能自由穿过，先要分泌基质金属蛋白酶(MMPs)通过变形运动才能穿过铺有Matrigel的滤膜。

二、Transwell小室实验操作步骤

步骤详解：

a、基质胶准备：提前一晚将基质胶放入4℃过夜融化；用无血清培养基稀释Matrigel基质胶(冰上操作，枪头预冷)；上室各加100uL(20-30ug/孔)，放入37℃培养箱中待其凝固，出现“白色层”；

b、Transwell小室处理：用无血清培养基洗Matrigel2次；

c、铺板：每孔上室加入150μL细胞悬液，下室加入500uL完全培养基；铺板密度迁移实验建议每板铺7000个，侵袭实验建议每板铺70000个；

d、固定：取出小室，用PBS洗2次，4%多聚甲醛固定15~30 min；

e、染色：取出小室，用PBS洗2次，结晶紫染色20 min，PBS洗2次；

f、拍照：100×拍照。

三、Transwell小室实验结果分析

1、图片展示及计数

2、迁移率计算及柱状图展示

迁移率=实验组细胞迁移数/对照组细胞迁移数

四、Transwell小室实验适用范围

(1)共培养体系：小于3.0μm孔径条件下，细胞不会迁移通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0μm以下孔径，常用0.4、3.0μm；将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞A、B分泌或代谢产生的物质对彼此的影响；

(2)肿瘤细胞迁移实验：常用8.0、12.0μm膜，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力；

(3)肿瘤细胞侵袭实验：常用8.0、12.0μm膜，原理与肿瘤细胞迁移实验类似；与细胞迁移实验不同的是，聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶，用以模仿体内细胞外基质。

注意：细胞迁移是涉及多个步骤、高度完整的过程，在癌症转移、动脉粥样硬化和关节炎等疾病恶化中起重要作用；迁移能力强的细胞其侵袭能力不一定强；反则成立。

五、Transwell小室实验注意事项及常见问题

1、铺基质胶时应注意的问题

Matrige在温度过高或过低的情况下易凝固，因此操作所需枪头和离心管应提前在4℃预冷。用无血清培养基稀释Matrigel基质胶，上室加100μL(20-30pg/孔)放入37℃培养箱中待其凝固，出现“白色层”；

2、迁移过程中出现气泡应该处理气泡会使下层培养液的趋化作用减弱，出现气泡时将小室取出用枪头戳破或吸出，再将小室放回。

注意事项1：确定单一趋化因素、血清、药物或特定趋化因子等；

注意事项2：迁移或侵袭实验最终细胞形态可能会改变；

注意事项3：把控接种密度和迁移/侵袭时间。

细胞划痕实验的操作步骤及适用范围【附视频教程】点此跳转

Transwell小室实验视频教程地址(建议微信打开)：http：//weike.fm/R403947292

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