大家好！今天普拉特泽生物继续跟大家一起学习——巨噬细胞原代提取巨噬细胞原代提取是细胞生物学和免疫学研究中常用的一种技术，用于从生物体内直接获取具有生物活性的巨噬细胞。

以下是以小鼠为例的巨噬细胞原代提取方法的详细步骤和注意事项：

一、实验准备

‌●实验动物‌：选择SPF级小鼠，确保实验动物的健康状态。

‌●试剂准备‌：

①细胞培养基（如RPMI 1640、DMEM等）

②胎牛血清

③双抗（青霉素和链霉素）

④巯基乙酸盐肉汤（或其他巨噬细胞刺激物）

⑤PBS（磷酸盐缓冲液）

⑥红细胞裂解液（如需要）

‌●器械准备‌：

①一次性注射器

②手术器械（如手术剪、眼科镊、眼科剪等）

③离心管

④细胞培养板或培养瓶

二、巨噬细胞原代提取步骤

●腹腔巨噬细胞提取：

⒈‌腹腔注射‌：在实验前三天，每天向小鼠腹腔注射1mL的3%巯基乙酸盐肉汤，以刺激腹腔内巨噬细胞的增殖。

⒉小鼠处理‌：

⒊脱颈处死小鼠后，用75%酒精浸泡3-5分钟进行消毒。

⒋将小鼠仰卧固定于解剖板上，剪开腹部皮肤暴露腹膜。

‌●腹腔灌洗‌：

⒈用注射器吸取预冷的PBS（或含双抗的细胞培养基）5mL，缓缓注入小鼠腹腔内。

⒉轻揉小鼠腹部数次，使液体在腹腔内充分流动。

⒊静置3-5分钟后，用注射器抽取腹腔灌洗液至离心管中。

‌●细胞分离‌：

⒈将收集的腹腔灌洗液进行离心（1000 rpm，5-10分钟），去除上清液。

⒉用含双抗的细胞培养基重悬细胞沉淀，并计数。

‌●细胞培养‌：

⒈将细胞接种至细胞培养板或培养瓶中，置于37℃、5% CO2培养箱中孵育2-4小时，使巨噬细胞贴壁。

⒉弃去未贴壁的细胞，更换新的培养基继续培养。

●骨髓巨噬细胞提取（简要说明）

⒈骨髓巨噬细胞的提取相对复杂，通常涉及以下步骤：

⒉小鼠处理‌：处死小鼠后，去除腿部皮肤和肌肉，暴露股骨和胫骨。

⒊骨髓冲洗‌：用注射器吸取含双抗的细胞培养基冲洗骨髓腔，收集骨髓细胞。

‌⒋细胞分离与培养‌：通过密度梯度离心、红细胞裂解等方法去除杂质细胞，将骨髓细胞接种至培养瓶中，在含有特定细胞因子（如MCSF）的培养基中培养，诱导其分化为巨噬细胞。

三、注意事项

‌⒈无菌操作‌：整个操作过程中需严格遵守无菌操作规范以防止污染。

⒉细胞活性‌：确保使用的试剂和培养基适合巨噬细胞的生长和功能维持。

⒊培养条件‌：控制培养箱的温度、湿度和CO2浓度等参数以提供适宜的生长环境。

⒋细胞观察‌：定期观察细胞的生长状态和形态变化以便及时调整培养条件。

以上是以小鼠为例的巨噬细胞原代提取方法的简要介绍，具体步骤可能因实验条件和需求而有所调整。

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