FISH染色实验步骤由普拉特泽生物为大家总结分享，普拉特泽生物长期承接各种科研实验项目，积累大量的实操经验，本文就来给大家分享一FISH 染色的实验步骤

一、实验步骤

    1.切片脱蜡水化。

    
    2.通透
    a.【1×PBS】清洗5 min；b.加入预冷的【通透液】（含0.5%TritonX-100的PBS），4°C静置5 min；c.弃去【通透液】后，加入【1×PBS】清洗5 min，3次。

    
    3.探针检测
    a.加入200 uL【预杂交液】，37°C封闭30 min；（预杂交液：将适量Blocking Solution与Pre-hybridization buffer按照1：99混匀后，37℃孵育至透明澄清状态（约30 min）后，分装保存。在使用前，须在37℃气浴或水浴中孵育至澄清透明。）

    b.预杂交同时，将【杂交液】在37°C中预热；1）c.避光条件下，把2.5 uL探针加入到100μl【杂交液】中；注：探针浓度可根据具体实验情况进行优化。杂交液配制：将适量BlockingSolution与HybridizationBuffer按照1：99混匀，37℃孵育30 min后分装保存。在使用前，须先在37℃气浴或水浴中孵育30 min。杂交液颜色偏黄属于正常现象。

    注：Pre-hybridizationBuffer（试剂A）和HybridizationBuffer（试剂B）从低温取出时可能有沉淀析出，属于正常现象。

    d.弃去切片中的【预杂交液】，加入100uL含有探针的【探针杂交液】，避光，37°C杂交过夜。

    e.避光，42°C，【杂交洗液I】清洗3次，每次5 min，以降低背景信号；

    f.避光，42°C，【杂交洗液II】清洗1次；g.避光，42°C，【杂交洗液III】清洗1次；h.避光，【1XPBS】清洗，室温5 min。注：所有指定温度的步骤，注意将相关试剂预热到对应实验所需温度后再使用。
    
    4.(如组织有自发荧光，可增加步骤苏丹黑自发荧光淬灭剂进行淬灭。）

    5.封片避光条件下，滴加封片剂用盖玻片密封，进行荧光检测。

 
 二、实验结论

   DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色，阳性表达为相应荧光素标记其他颜色荧光。阳性结果可对比阴性对照结果来进行判别。

这期FISH染色实验就到这里结束啦，所以如果您有FISH染色的实验的需求欢迎随时咨询普拉特泽生物~或者可与我们技术老师直接联系哦:18570028002（微信同号）