细胞运动实验大总结!——总有你喜欢的那一款
来源/作者:普拉特泽生物-医学整体课题外包
细胞运动实验包括体内实验和体外实验,体内实验一般包括皮下移植瘤和原位移植瘤,我们之前已经发过裸鼠成瘤的相关文章,那我们今天呢主要想给大家分享的是体外实验。
细胞运动的体外实验常用方法有:划痕实验、侵袭实验、趋化实验。
划痕实验
细胞划痕法是测定了肿瘤细胞的运动特性的方法之一。在体外培养的单层细胞上,划痕致伤,然后在加入药物等实验条件下观察其对肿瘤细胞迁移的影响。
侵袭实验
transwell侵袭实验,其实原理简单地说就是用一层膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开,细胞放在低营养的培养液里,为了找吃的,细胞会往高营养的培养液里面跑,但是有膜挡着,所以要穿过膜才行。在膜上涂上一层基质胶,模仿细胞外基质,于是细胞要把基质消化了才可以从低营养的培养液跑到高营养的培养液里面,最后我们检测高营养的培养液里细胞量就可以知道细胞的侵袭能力了。
实验步骤
(1)Matrigel在4℃过夜融化;
(2)用4℃预冷的无血清培养基稀释Matrigel至终浓度1 mg/mL,冰上操作;
(3)在chamber上室底部中央垂直加入100 μL稀释后的Matrigel,37℃温育4-5小时使其干成胶状;
(4)待测细胞培养至对数生长期,消化细胞,用PBS和无血清培养基先后洗涤一次,用无血清培养基悬浮细胞,计数。
(5)在下室(即24孔板底部)加入含10%血清的培养基,上室加入细胞悬液,继续在孵箱培养24小时;
(6)用镊子小心取出chamber,吸干上室液体,移到预先加入约800 μL甲醇的孔中,室温固定30分钟;
(7)取出chamber,吸干上室固定液,移到预先加入约800 μL Giemsa染液的孔中,室温染色15-30分钟;
(8)用小镊子小心揭下膜,底面朝上晾干,移至载玻片上用中性树胶封片;
(9)显微镜下取9个随机视野计数,统计结果。
注意事项
(1)Matrigel在过高或过低的温度均易凝固,因此操作所需枪头和离心管应提前在4℃预冷;
(2)铺胶时保证液面水平,胶的厚度均匀一致,切勿产生气泡;
(3)为了避免操作污染,每次实验可预先另准备一块24孔普通培养板;
(4)细胞悬液加入膜中央,尽量保证液面水平;
(5)Chamber和膜上都无法标记,操作时应小心避免混淆实验组和对照组;
(6)充分晾干,避免残留水分导致镜下聚焦不一致;
(7)小室内边缘残留的细胞会影响实验结果,用棉棒擦干。
趋化实验
趋化性(Chemotaxis,亦被称为化学趋向性)是趋向性的一种,指身体细胞、细菌及其他单细胞、多细胞生物依据环境中某些化学物质而趋向的运动。适于分析在基质胶中快速或缓慢迁移的非贴壁细胞的趋化性反应,例如淋巴细胞,在间质流的肿瘤细胞和内皮细胞的化学趋向性。正趋化性指趋向较高化学物质浓度的运动,而负趋化性则相反。
上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室的细胞量可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。
(1)细胞B对细胞A的趋化作用:将细胞A种于上室,细胞B种于下室,可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的趋化作用。
(2)趋化因子对细胞的趋化作用:将细胞种于上室,下室加入某种趋化因子,可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。
为了便于大家更直观地了解这三种实验,我们做了一个小表格。
那关于细胞运动实验就介绍到这了,如果还有其他想了解的实验细节欢迎大家来留言咨询或讨论哦。