大家好！今天普拉特泽生物继续跟大家一起学习新的实验——Dot Blot斑点杂交实验。Dot Blot斑点杂交是指将待测的DNA变性后点加在硝酸纤维素膜（或尼龙膜、NC膜）上，用已标记的探针进行杂交，洗膜（除去未接合的探针），放射自显影，判断是否有杂交及其杂交强度，主要用于基因缺失或拷贝数改变的检测。

        Dot blot斑点杂交实验介绍由普拉特泽生物分子检测品台总结分享，分子检测平台为广大科研实验人员提供dot blot斑点杂交外包实验服务，先一起来学习学习什么是Dot blot吧！

        斑点杂交（Dot blot）是将被检标本点到膜上，烘烤固定。这种方法耗时短，可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品，为使点样准确方便，市售有多种多管吸印仪（Manifold），如MinifoldⅠ和Ⅱ、Smart Blotter(Wealtec)、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-Dot，它们有许多孔，样品加到孔中，在负压下就会流到膜上呈斑点状或狭缝状。反复冲洗进样孔，取出膜烤干或紫外线照射以固定标本，这时的膜就可以进行杂交。

        Dot blot斑点杂交实验可分为DNA、RNA和完整细胞的斑点杂交三类，三种方法各有不同。

        1、DNA斑点杂交方法介绍

         （1）先将膜在水中浸湿，再放到15×SSC中。

         （2）将DNA样品溶于水或TE，煮沸5 min，冰中速冷。

   （3）用铅笔在滤膜上标好位置，将DNA点样于膜上，每个样品一般点5μl(2~10μg DNA)。
   （4）将膜烘干，密封保存备用。

        2、RNA斑点杂交方法介绍

        RNA斑点杂交法与DNA斑点杂交方法类似，每个样品至多加10μg总RNA（经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化），方法是将RNA溶于5μl 焦碳酸二乙酯（DEPC）水，加5μl 甲醛/SSC缓冲液（10×SSC中含6.15mol/L甲醛），使RNA变性，然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上，烘干。

        3、完整细胞斑点杂交方法

        应用类似检测细菌菌落的方法，可以对细胞培养物的特异序列进行快速检测，将整个细胞点到膜上，经NaOH处理，使DNA暴露、变性和固定，再按常规方法进行杂交与检测。有人曾用此法从105个培养细胞中检测到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整细胞斑点印迹法可以用于筛选大量标本，因为它使细胞直接在膜上溶解，所以DNA含量甚至比常用的提取法还高，又不影响与32P标记的探针杂交，但它不适用于非放射性标记探针，因为DNA纯度不够，会产生高本底。

        Dot blot斑点杂交实验法简单实用，适用于大样本数同时进行检测，但是由于同一斑点位置，除了目标核酸分子外，还存在其他成千上万种不同的核酸分子，而这些核酸分子有可能会与探针分子部分结合，促进探针分子与目标核酸分子的结合，可能导致阳性结果放大甚至是假阳性结果，分析检测结果是要结合实际考虑到这一点。

        好啦，那Dot Blot斑点杂交实验就简单介绍到这里啦，如果您还有其他关于Dot Blot的技术问题或有Dot Blot实验外包的需求，欢迎选择普拉特泽生物~下期给大家分享Dot Blot实验的详细操作步骤，咱们下期见！