为什么你的彗星没有尾巴?
来源/作者:普拉特泽生物-医学整体课题外包
彗星实验又称单细胞凝胶电泳,包括中性彗星电泳和碱性彗星电泳,主要用于检测DNA损伤。由于单个细胞经电泳后的形态 就像一个扫把,因此它还有一个更加让人过目不忘的中国外号---扫把星实验。
那么,问题来了:为什么DNA经过电泳后会出现尾巴呢?
下面就要来一波专业术语:
在进行单细胞凝胶电泳的过程中,带负电荷的DNA会向正极移动。完整的DNA因其分子量比较大,无法从细胞核迁移出来。
而损伤的DNA,会产生不同大小的小的DNA片段,经过琼脂糖凝胶电泳和DNA染色后,就可在显微镜下观察到运动状态的彗星状拖尾现象(看下图),然后科学家们就可以通过计算拖尾率,来评估细胞内DNA的损伤程度啦!
正常组 损伤组(我长尾巴了)
我们被问到最多的一个问题,就是为啥我的彗星没有拖尾?
这个原因可能是多方面的,在小编看来主要有以下2点:
1.你的细胞并没有发生DNA损伤
这里也提醒大家并不是所有的实验都可以做出预期结果,所以彗星实验中设置好阳性对照是至关重要的。
2.细胞裂解不充分,DNA无法从核中出来,无法形成拖尾。
细胞裂解是彗星实验的关键,这里我们提供一个碱性裂解液的配方供大家参考(终pH=10),谁用谁知道!
好人做到底,其他试剂配方,一并罗列不用谢:
当然,还可能是别的什么原因。比如,你在老板课题的胁迫下第一次尝试做它。然后,一顿骚操作
那这个彗星实验是怎么做的呢?
以碱性彗星电泳为例, 彗星实验主要包括以下7个步骤:
a. 细胞预处理(消化、计数、铺板)
b.裂解
c. 解旋
d. 电泳
e. 中和
f. 染色
g. 拍照
是不是懒得看字?反正也看不太懂。
来,贴心的我们已经为您精心准备了《彗星实验》真人技术讲解,及操作演示视频: