彗星实验/单细胞凝胶电泳实验操作步骤【附视频教程】
来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台
彗星实验操作步骤由普拉特泽生物为大家总结分享,文末附有彗星实验操作视频教程供大家学习。普拉特泽生物细胞实验平台专业承接彗星实验代做、外包服务,彗星实验作为细胞平台的常规实验,我们自己总写了一套专业高质的操作步骤,在此分享给大家,欢迎交流分享哦:
彗星实验第一步:分离制备单细胞悬液:
(1)体外培养的细胞株:用胰酶消化,最后用PBS悬浮吹打成单细胞悬液,细胞要计数,具体的量我前边已经说过。
(2)体内脏器细胞:处死动物,取出脏器,于Hanks’液中制备成单个细胞悬液。
彗星实验第二步:胶板制备:
(1)取100μl于45℃水浴中保温的0.5%NMA,铺于磨沙载玻片上,形成底胶。盖玻片推匀,不能有气泡,4度凝固5至8分钟。
(2)水平取下盖片,取100μl于37℃水浴中保温的0.5%LMA与20μl细胞悬液(约400彗星实验)。
第三步:细胞裂解与电泳:
(1)将制备好的胶板去掉盖玻片后,浸于4℃预冷的细胞裂解液中,在4℃下裂解2.5到3小时。
(2)取出胶板,用双蒸水浸没漂洗后放入电泳槽中,浸泡在4℃预冷的电泳液中解旋20分钟。
(3)玻片水平放置阳极端附近,4℃电泳20到25分钟(25V,300mA)。可在电泳槽周围加冰块以保持低温。
彗星实验第四步:中和与染色:
(1)电泳结束,将胶板浸泡于中和液中,每次10分钟,共中和3次,每次要更换中和液。最后晾干。
(2)取出胶板,置于染色缸中,在2μg/ml的EB染色液中,暗处染色5到10分钟。
(3)蒸馏水漂洗2次,每次5分钟。
好啦,那实验步骤我们就说到这里啦,视频教程请点击:《彗星实验理论+实操》 。但是要提醒大家,不同的样本和情况实验步骤要相应的进行调整哦,如果有把握不准的欢迎给客服留言,技术会耐心给大家根据样本情况调整实验步骤,快来留言吧!