—— 从造模到数据分析的全流程关键点

    非酒精性脂肪肝（NAFLD）动物模型实验注意事项由普拉特泽生物为大家总结分享，普拉特泽生物动物实验平台专业承接裸鼠成瘤实验外包、动物造模等动物实验代做服务，积累专业丰富的实验操作经验。
上期我们分享非酒精性脂肪肝NAFLD模型常见问题及解决方案后大家都说不够详细，有一些注意事项没有写出来
那今天咱们就为大家专门出一期非酒精性脂肪肝（NAFLD）动物模型实验注意事项，快点学起来吧！

通过之前的学习我们都知道建立稳定的非酒精性脂肪肝（NAFLD）动物模型是研究该疾病发病机制及药物疗效的关键步骤。然而，实验过程中常因操作不当、模型选择错误或数据采集不规范导致结果不可靠。
本期系统梳理NAFLD模型实验中的关键注意事项，帮助研究者提高实验成功率，减少误差。

一、模型选择：匹配研究目标是成功的第一步

1. 不同研究目的的最佳模型选择

单纯脂肪变性研究：高脂饮食(HFD)12-16周

NASH(炎症+脂肪变性)研究：MCD饮食4-6周或HFHFrHC饮食20-30周

纤维化研究：HFHFrHC+低剂量CCL4(0.2mL/kg/周)

专家建议：基因修饰模型(如ob/ob小鼠)适合代谢研究，但需结合饮食干预才能诱导NASH！

二、动物选择：这些细节决定实验成败

2. 品系与性别的科学选择

①首选品系：C57BL/6(对高脂饮食最敏感)

②性别差异：雄性更易形成脂肪肝(雌性需去卵巢或延长造模时间30%)

③周龄控制：8-12周龄小鼠，同批次年龄差≤3天

④实验证明：年龄差异过大会导致代谢指标波动高达25%！

三、饲养管理：不可忽视的环境因素

3. 饲料选择与保存要点

①HFD配方：60%脂肪(推荐Research Diets D12492)

②MCD饮食：短期造模快(但需密切监测体重)

③保存条件：-20℃密封，开封后2周内用完

4. 标准化饲养环境

①温湿度控制：22±1℃，50-60%湿度

②光照周期：固定12h/12h光暗循环

③饲养方式：代谢研究建议单笼饲养

④数据警示：温度波动超过2℃可使肝脂含量差异达15%！

四、实验操作：这些步骤最容易出错

5. 标准化取材流程

①禁食处理：统一禁食6小时

②取材时间：固定上午9-11点(减少昼夜影响)

③样本处理：离体5分钟内液氮速冻

6. 肝脏样本处理方法

分区取材：左叶生化检测，右叶病理分析

固定选择：

石蜡切片：4%多聚甲醛固定24h

冰冻切片：OCT包埋-80℃保存

经验分享：取材时间不统一可使ALT值波动30%以上！

五、检测指标：多维度验证模型成功

7. 必测基础指标

体重/肝重比：增加≥30%表明模型成功

肝功能：ALT/AST>1提示脂肪性肝炎

胰岛素抵抗：HOMA-IR指数增加2倍

8. 组织学评估标准

H&E染色：NAS评分(脂肪变性+炎症+气球样变)

天狼星红：纤维化分期(Ishak/METAVIR)

油红O：脂肪变性定量(ImageJ分析)

六、常见问题：这些坑千万别踩

9. 模型不成功的解决方案

脂肪变性不明显：

✓ 检查饲料是否氧化

✓ 延长造模至16周以上

炎症评分低：

✓ 增加1-2%胆固醇

✓ 改用HFHFrHC饮食

纤维化不稳定：

✓ 结合CCL4干预

✓ 延长至24周以上

10. 数据可重复性保障

①内参对照：β-actin+GAPDH双内参

②技术重复：每个样本≥3次重复

③阳性对照：每批实验设置参考样本

④发表必备：论文中必须注明动物品系、周龄、饲料配方等关键信息！

七、前沿技术：提升研究水平的新选择

⒈活体成像技术：MRI-PDFF无创检测肝脂含量

⒉单细胞测序：解析NAFLD肝细胞异质性

⒊空间转录组：定位脂肪变性相关基因表达

总结：NAFLD模型成功的黄金法则

① 精准匹配：根据研究目的选择最佳模型

②严格标准化：从饲养到取材全程控制

③多维度验证：代谢+病理+分子三位一体

④数据严谨性：设对照+重复+盲法评估

掌握这些关键点，你的NAFLD研究将更具说服力和可重复性！建议立即收藏起来做NAFLD模型实验的备用可以直接联系我们：18570028002 或 微信 pulateze666会把这些资料发送给大家哦。