组织芯片制作步骤由普拉特泽生物病理实验平台为大家分享，普拉特泽生物长期为广大科研人员提供组织芯片外包代做服务。组织芯片是继基因芯片、蛋白质芯片之后出现的又一种重要的生物芯片,主要用于研究同一种基因或蛋白质分子在不同细胞或组织中表达的情况。

        一、组组织芯片详细制作步骤

        1、芯片微陈列设计：在构建组织芯片之前，应该预先计划检测多少样本，然后相应地进行设计。对大多数研究来说，在一个常规的载玻片上放置60~100个样本已经足够了。当样本超过100例时，上样、切片、染色及研究各个步骤都要求相当熟练，并且由于样本排列过于紧密，有可能导致芯片制作和研究失败。因此在计划检测数百个到上千标本时可考虑多做几个组织芯片。

        2、收集病例及相关蜡块：挑选出具有随访资料的不同发展阶段的肿瘤组织蜡块，根据HE切片对石蜡标本中有代表性的点进行标记，包括典型的肿瘤和相应的正常组织，以构建肿瘤组织芯片。

        3、TMA受体蜡块制备：取97.5克莱卡石蜡+2.5克蜂蜡（2.5%）混合，制成长36mm*宽26mm*高17mm的空白蜡块，在该蜡块20mm×16mm范围内设计10×8点组织陈列。组织四周预留0.5cm-0.7cm空间，用组织仪打孔制成TMA蜡块。

        4、在组织芯片制作机上用细针对受体蜡块打孔，孔径以1~1.5mm比较适宜。

        5、同样在供体蜡块上标记的相应部位打孔采集组织芯。孔径同样为1~1.5mm。

        6、将组织芯转移到受体模块的孔中，每个组织芯之间的间距以0.2mm为佳。

        7、为了防止在打点、切片、染色或免疫组化过程中出现漏点，滑片及掉片现象，每个样本可以上样1-2个点。

        8、将构建好的TMA芯片蜡块放在相宜的塑料盒子内，并严密固定防止移位。放入55℃温箱中约10分钟，在蜡将要完全溶解前，取出室温下冷却，使受体模块的蜡与新插入的小圆柱状组织溶为一体，取下蜡块，于4℃冰箱中保存备用。

        9、切片前，蜡块需在4℃中预冷4h左右，然后夹在切片机上进行修正，等修到全部组织完整为止。用-20℃预冷冰袋贴在蜡块上5-10min左右，快速连续切片30-50张左右，再用冰袋冷冻组织块，或直接在冰冻切片机内进行，直至将组织切完为止。将4μm连续切片分别漂在凉水中，让其自然展开，按顺序将切片转移至45℃的温水中展片2min左右，将其贴在浸有APES切片黏合剂的载玻片上晾干，60℃中烤片3min左右，58℃中继续烤片18h，-20℃保存备用。

        二、组织芯片制作注意事项

        1、从供体蜡块中采集组织芯时，由于外检蜡块采用普通石蜡，其韧性差、质地硬容易碎裂和使打孔针弯曲，所以要细心、耐心地采集组织芯，并可以将外检蜡块在37℃预热后再采集。

        2、构建好的TMA芯片中，要使组织芯和受体蜡块融合成一体，需要在55℃温箱加温。此时温度、时间调控十分重要，既要使组织芯不易掉片、滑片，又要防止受体蜡块融化移动组织芯位置。

        3、载玻片的清洁和防止掉片处理亦是制作切片的关键不能忽视。

        好啦，那关于组织芯片的实验步骤我们就说完啦，下期给大家介绍组织芯片制作的各种注意事项，如果您对组织芯片有什么疑问或有组织芯片代做外包的需求，欢迎随时联系普拉特泽生物~