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血管生成实验基本步骤与注意事项【新手入门】

2021-05-11 18:12:00

来源/作者:普拉特泽生物-医学整体课题外包

血管生长是肿瘤发生的关键步骤。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤,一旦生长直径超过1~2 mm,都会有血管生成,这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子,诱导血管生成。由于肿瘤组织这种新生血管结构及功能异常,且血管基质不完善,这种微血管容易发生渗漏,因此肿瘤细胞不需经过复杂的侵袭过程而直接穿透到血管内进入血流并在远隔部位形成转移。越来越多的研究表明,良性肿瘤血管生成稀少,血管生长缓慢;而大多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速,因此,血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用,抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移。

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血管生成实验的技术原理主要是应用Matrigel模拟机体环境,上面接种肿瘤细胞,观察血管生成情况。


主要步骤

Step1:细胞培养

Step2:细胞转染或药物处理

Step3:铺Matrigel

Step4:接种细胞

Step5:观察血管生成情况

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实验过程中需要注意:

1、实验前一天需要将Matrigel置于冰盒,放入冰箱中,同时需要准备一些预冷的枪头用于吸取Matrigel胶;

2、Matrigel胶加到血管生成载玻片时注意枪头要垂直于内孔的正上方加入Matrigel,防止有Matrigel流经上孔而留下残留胶;

3、需要按照细胞的生长速度定时采集图像,并且对其成管长度、覆盖面积、成环数和结点进行测量和记录,并且对其进行统计分析;

4、分上下孔的ibidi血管生成载玻片能去除凹液面,使成像效果更好。

血管生成2.jpg


通过案例图可看到,与对照组相比,处理因素能够明显抑制血管生成。

血管生成机制复杂,参与并促进血管生成的因子也众多,通过体外的血管生成实验能很好的模拟肿瘤的血管发生过程,并且研究药物对这一过程的影响。你了解过哪些主要利用了血管生成实验的研究呢?欢迎转发分享哦~