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细胞增殖检测之EdU法及其应用

2023-08-17 16:58:16

来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台

前两篇我们总结了检测EDU技术的方法以及EDU检测细胞增殖结果是如何分析的,今天来学习细胞增殖检测时关于EdU法及其应用,让我们一起来回顾一下看看吧,温故而知新。

    一、了解细胞增殖的新视角 —— 检测EDU技术的方法


 二、EDU检测细胞增殖结果如何分析?


 链接奉上,大家快点踩着普拉特泽的肩膀去摘苹果吧!那现在我们来接着总结:


EdU法是一种基于细胞内新合成DNA的标记方法,用于评估细胞的增殖活性。之前我们也提到EdU的原理简介,让我们再务实一下基础吧!过下面将详细介绍EdU法的原理和应用。


原理: EdU(5-乙炔基-2’-脱氧尿苷)是一种类似于脱氧尿苷(dU)的核苷酸,它具有一个乙炔基团。在细胞培养基中添加EdU后,细胞会主动摄取EdU并将其嵌入到新合成的DNA链中。与传统的BrdU法不同,EdU法不需要使用酸性脱氧核糖核酸酶(DNase)来使DNA链断裂,因此可以避免DNA断裂的非特异性效应。


在EdU法中,通过使用荧光染料或特定的抗体与EdU结合,可以将EdU标记的DNA可视化。这种结合可以通过点击化学反应实现,其中EdU上的乙炔基与标记物上的点击试剂(例如,含有偶氮基团的染料或生物素)发生共轭反应。通过荧光显微镜观察或流式细胞术分析,可以计算标记阳性细胞的数量,从而评估细胞的增殖活性。

EdU法在细胞生物学研究中有广泛的应用。以下是一些常见的应用领域:


细胞增殖评估:通过检测EdU标记的细胞数量,可以定量评估细胞的增殖活性。这对于研究细胞周期的调控机制、细胞增殖的动力学过程以及评估细胞增殖抑制剂的效果非常有用。


组织再生研究:EdU法可以用于研究组织再生过程中的细胞增殖。例如,在小鼠肝脏再生研究中,可以通过注射EdU来标记再生肝细胞,并通过检测EdU标记的细胞数量来评估肝脏再生的程度。


肿瘤生长研究:EdU法可以用于研究肿瘤细胞的增殖活性。通过标记肿瘤细胞中的EdU,可以观察肿瘤细胞的增殖速率,并评估抗肿瘤药物的疗效。


发育过程研究:EdU法可以用于研究发育过程中的细胞增殖。例如,在胚胎发育研究中,可以通过注射EdU来标记正在增殖的细胞,并通过检测EdU标记的细胞数量来研究胚胎发育的动态过程。


关于EdU 检测应用:


【1】将EdU作为细胞增殖的分子探针,应用于高含量的siRNA (high-content siRNA, HCS)筛选实验,对细胞增殖进行评估。


【2】Wiebusch等使用EdU和流式细胞仪研究人巨细胞病毒细胞周期的基因表达。EdU在用于检测细胞增殖的很多实验中发挥了突出的作用,展现了其广阔的应用前景。


【3】EdU标记技术在细胞培养中的应用是最基本的,Hiraoka等【3】用EdU标记非雄激素依赖型前列腺癌PC3细胞, 根据低氯离子浓度的培养基组, DNA中有EdU掺入的细胞数目较对照组减少, 得出低氯离子浓度会延长细胞周期的各个阶段, 而导致整个细胞周期的终止。


【4】Zeng等用EdU标记法检测成体动物神经系统的细胞增殖, 并与传统的BrdU标记方法相对照, 充分肯定了EdU用于检测细胞增殖的可行性。


【5】在植物细胞培养中, Kotogány等通过用EdU标记植物细胞(玉米、水稻、拟南芥等)进行实验, 相对于3H-TdR和BrdU,EdU检测植物细胞增殖不需要进行细胞壁的消化,节省了DNA变性的步骤,减少了整个细胞增殖检测实验的时间, 更有效并真实地展示了细胞、细胞核以及染色体的形态学特征。


综上所述,EdU标记S期细胞及检测细胞增殖是一种可靠、通用、快速、简单以及没有放射性的方法,同时可以结合其他标记进行多参数的分析, 具有简单、快速、准确和兼容的特点, 适合多种研究方式和多层次分析, 这一方法必将在细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复和病毒复制等方面的研究中发挥重要作用


好啦,那关于细胞增殖检测之EdU法及其应用我们就介绍到这里啦,还有关于细胞增殖检测更多问题咨询的欢迎留言哦,技术小姐姐会第一时间给到最专业的回复哒!还有需要细胞增殖检测代做服务请认准咱们普拉特泽