今天普拉特泽生物跟大家一起学习的是细胞冷冻与复苏操作的注意事项。在低于-700C 的超低温条件下，有机体细胞内部的生化反应极其缓慢，甚至终止，可以达到保存细胞的目的；而复时一般也在1-2 分钟内即恢复到常温，从而无冰晶损伤和溶质损伤产生，冻存的细胞经复苏后仍保持其正常的结构和功能。普拉特泽生物——细胞实验平台专业承接各类细胞实验代做，更保存有生物资源十余万种，提供细胞质粒购买服务，现在我们就来看看细胞的冷冻与复苏的操作注意事项吧！

        一、细胞冻存注意事项

        1、 DMSO配制的时候会放热，一定要等冻存液冷却后使用，避免灼伤细胞；

        2、 细胞离心后尽量吸干净上清液，减少培养基残留，避免稀释冻存液；

        3、 不建议手动梯度降温，温度不稳定，容易降低存活率；

        4、 注意程序降温盒内异丙醇的量必须高于最低刻度线；冻存5次后异丙醇需要更换一次，以免影响冻存效果；程序降温盒需恢复到室温以后才能继续使用，不能从冰箱拿出来直接使用；

        5、 细胞悬液加入冻存液以后尽量短时间的在常温放置，DMSO常温下对细胞损伤大，分装完成后立即转入程序降温盒放到-80度冰箱，不需要放4度；

        6、 -80度冻存过夜后可以转入液氮长期保存，转入液氮的过程需要对冻存盒进行保冷，不要长时间在常温暴露，避免冻存管融化；

        7、 若没有液氮罐，存放在-80度的时候一定要放靠里面的位置，避免开关冰箱导致温度不稳定。

        8、 细胞冻存后应取出一管复苏，检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存，为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养，观察细胞生长情况，再继续冻存；

        9、 由于没有使用冻存盒，在转入液氮的过程中一定要对冻存管做好保冷措施，不能直接用手拿，可以用干冰或者少量液氮保护后转移，操作过程注意安全；

        10、 转移过程要快，避免冻存管暴露于常温后融化；

        11、 若没有液氮罐，存放在-80度冰箱的时候一定要放靠里面的位置，避免开关冰箱导致温度不稳定；

        二、细胞复苏注意事项

        1、 水浴锅的位置如果与液氮罐不是一个房间，需要对冻存管进行保冷后转移到水浴锅旁，避免路途细胞表面融化；

        2、 细胞溶解过程快速摇晃以加速溶解；

        3、 已溶解的冻存细胞尽量短时间的在常温存放，尽快离心去除DMSO；

        4、 贴壁细胞复苏24小时后观察，若密度达到80%，则正常传代；若密度不到80%则继续培养到48小时再换液；

        5、 悬浮细胞复苏3天内不建议离心换液；

        6、 对DMSO不敏感的细胞在复苏时也可不离心，减少操作步骤，也可降低污染的几率。将解冻的细胞悬液直接转移至T25细胞瓶内，补加新鲜培养基，放入温箱内培养。但培养12~24h后必须换新鲜的培养基，移除死细胞。

        好啦，那关于细胞冷冻与复苏的注意事项我就讲到这里啦，不同的冷冻方法和一些特殊细胞的冷冻步骤也有出入，本文给大家介绍的是比较通用适合大部分细胞冻存与复苏的操作注意事项，如果您还有更多的操作技术问题或有细胞实验外包和细胞质粒购买的需求欢迎留言，普拉特泽生物细胞实验平台竭诚为您服务~

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