大家好，今天普拉特泽生物继续跟大家一起来学习生物医学研究的新热点——细胞焦亡。本文由普拉特泽生物细胞实验平台给大家详细分享，文尾附有细胞焦亡概述、文献、方法打包视频供大家学习，现在我们就来学习细胞焦亡的研究方法与检测方式吧！

        首先是细胞焦亡的特点：

        细胞焦亡发生时，细胞会发生肿胀，在细胞破裂之前，细胞上形成凸出物(图1，早期细胞焦亡)，之后细胞膜上形成孔隙，使细胞膜失去完整性，释放内容物，引起炎症反应，此时，细胞核位干细胞中央(图1，晚期细胞焦亡)，随着形态学的改变，细胞核固缩，DNA断裂。

        细胞焦亡过程，具有caspase-1依赖性。在外界条件的刺激下，caspase-1前体可以与模式识别受体NLRP1、NLRP3等通过接头蛋白ASC变为一个高分子复合物，即炎症小体，也称依赖 caspase-1的炎症小体。细胞在caspase-1激活同时会释放出炎性因子白细胞介素-1β(interleukin-1βIL-1)和IL-18，进而吸引更多的炎性细胞，加重炎症反应。焦亡发生时形成子隙，它允许细胞质的内容物，如乳酸脱气酶(lactate dehvdrogenase，LDH)和炎性细胞因子释放，荧光标记的膜朕蛋白V，7-氨基放线菌D或碘化丙啶进入细胞。

        其次是细胞焦亡的信号通路：

        细胞焦亡属于炎症性死亡途径，按激活机制，可分为Caspase-1依赖和不依赖两种途径。两种途径都是通过切割GSDMD后形成N端游离的肽殷，这一肽殷会诱导细胞形成孔道并导致细胞破裂，释放胞质成分。两种途径都能同时诱导IL-1B和IL-18的前体进行切割，形成成熟的IL-1和IL-18。不同的只是是否直接激活Caspase-1。

        然后就是我们本文的重点，细胞焦亡的研究方法：

        细胞焦亡的机制中GSDMD的切割，IL-1B和IL-18前体的切割成熟和释放是关键信号，因此证明所诱发的细胞死亡方式是否为细胞焦亡，需要几个关键的实验证据:

        (1)GSDMD的切割(Western检测);

        (2)Caspase的激活，主要是Caspase-1，Caspase-4，Caspase-5，Caspase-11。(Western检测);

        (3)IL-1β和IL-18前体的切割成熟和释放(Western，ELISA等);

        (4)细胞形态学检测(CCK-8等);

        (5)染色质完整性检测(Tunel等)。

        而细胞焦亡完整检测方式如下:

        1、形态变化

        (1)扫描电镜观察细胞形态;

        (2)免疫荧光染色(GSDMD/GSDME);

        (3)Tunel检测;

        2、检测焦亡相关基因及蛋白

        (1)q-PCR/Western Blot方法检测焦亡相关基因或蛋白的表达水平(例如，Caspase-14、5、11;GSDMD;Cleaved Caspase-3IL-1BIL-18NLRP3ASC等);

        (2)ELISA试剂盒检测炎症因子的水平;(3)CCK8法测定细胞活力;

        (3)免疫组化检测组织蛋白的表达。

        细胞焦亡的研究方法与检测方式我们就讲完啦，想学习更多细胞焦亡内容的可点击《细胞焦亡专题》全面学习呀，有更多的建议或者关于细胞焦亡研究内容的补充欢迎给客服留言，欢迎探讨哦。