细胞凋亡实验检测详细步骤由普拉特泽生物流式检测平台总结分享，普拉特泽生物为广大科研人员提供全面的生物医学科研实验外包服务，真实准确，值得信赖。

   上篇我们给大家详细解释了什么是细胞凋亡，相信大家都有一个相对清晰的了解，那么说完了细胞凋亡的概念我们来看看如何检测细胞凋亡，本文分享的是用流式检测细胞凋亡的实验步骤，一起来学习吧。

   第一步、制备凋亡检测细胞：选择一盘10cm皿阳性细胞，打开培养皿的盖子，将细胞置于紫外线下照射2小时，或使用细胞凋亡阳性对照试剂盒提前处理阳性待测细胞。

   第二步、收集凋亡检测细胞：将待测阴性细胞与阳性细胞的上清分别收集于15mL的离心管中，使用2mL的BSP冲洗细胞，加入1mL不含有EDTA的胰酶至37度的培养箱中消化，直到大片细胞都脱离培养皿底。用刚才收集的上清液终止消化后，转移到刚才的15mL离心管内，放到离心机上，2000rpm室温离心5 min，弃上清。

   第三步、清洗凋亡检测细胞：用1mL常温PBS重悬细胞，转移至1.5mL离心管，弃上清，细胞清洗这一步很重要不能省略，防止影响上机检测时的实验结果。

   第四步、凋亡检测细胞计数：每组取2x10^6细胞。将计数板及盖玻片擦拭干净,并将盖玻片盖在计数板上，轻轻吹打细胞悬液,使细胞均匀分布;吸出少许细胞悬液滴在细胞入口,使细胞悬液充满盖玻片和计数板之间,静置1-2 min,使细胞沉降;注意盖玻片下不要有气泡,也避免细胞悬液进入旁边的槽中。在显微镜下对A/B/C/D四个大格内的细胞进行计数,压在大格四周边线上的细胞只计数压在2条边线上的细胞(如右侧和下方);若镜下有2个细胞组成的细胞团,则应按单个细胞计算;若细胞团数量较多,占细胞总量的10%左右,则说明细胞分散不好会导致计算不准确,需要重新制备细胞悬液。

   第五步、凋亡检测细胞染色：使用200uL缓冲液重悬细胞(2*106)，所有实验组与阴性对照需要双染，阳性对照需要设置两个染料的单染管。双染管加入5uLAnnexinV染料，5uL7-AAD，单染管加入单独的5uLAnnexinV染料或5uL7-AAD，标清楚单染染料名称。用手弹匀，避光染色15 min。染色过程中准备流式管和滤膜打开流式细胞仪，检查鞘液和废液情况。

   第六步、凋亡检测细胞过滤：染色完毕后，加入1mLBPS，上离心机2000rpm，在室温下离心5分钟，弃上清。再加入100ulPBS重悬，过滤。

   第七步、上流式细胞仪检测：打开SSC，FSC，BB515下的FITC通道，以及7-ADD通道，其他用不到的通道删除，记录检测数据方便后期分析结果。

   到此为止，细胞凋亡实验检测详细步骤我们就全部介绍完啦，还有不懂的或者补充的同学们可以给客服留言积极讨论哦~有需要细胞凋亡检测外包的老师欢迎随时联系普拉特泽，竭诚为您服务。