Transwell迁移实验报告由普拉特泽生物给大家解答与分享，普拉特泽生物细胞检测可承接各种细胞外包服务，包括CCK8/mtt/细胞增殖检测、原代细胞分离培养与鉴定、细胞周期等实验外包服务，本文继续给大家带来关于Transwell迁移实验报告，快来收藏吧！

一、实验目的

通过Transwell实验检测Hela细胞转染CDC20-sgRNA3或SP600125处理后其迁移能力的变化。

二、实验样品及分组

1.实验样本

备注：包括干预细胞用的相关试剂均按实验样品登记，每行登记一个或一组独立样品

2. 实验分组

细胞：Hela

分组：sgRNA-NC、CDC20-sgRNA3

处理：Con（0.1% DMSO）、SP600125处理（20 μM，48h）

三、实验结果

各组侵袭实验结果图（100×）

各组迁移实验结果柱形图（迁移数）

四、实验材料

1. 主要实验仪器

2.主要实验试剂及耗材

五、实验原理

阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成DNA脂复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前实验室最方便的转染方法之一，其转染率较高，优于磷酸钙法；由于脂质体对细胞有一定的毒性，所以转染时间一般不超过24小时。

迁移：Transwell小室上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力

六、实验步骤

1.细胞复苏

(1) 将ddH₂O预温至37℃。

(2) 戴上手套和口罩帽子，从液氮罐中取出装有目的细胞的冻存管（内有1 mL细胞混合液），立即投入37℃ ddH₂O中，轻摇冻存管使之在1分钟内快速溶解。

(3) 完全溶解后，75%酒精擦拭冻存管外壁消毒后带进超净台。

(4) 在超净台中，在15 mL灭菌离心管中预先加入10 mL新鲜配制的培养基，打开冻存管，将所有冻融的细胞悬液加入该离心管中，常温1000 rpm离心3分钟，吸除上层的培养液。

(5) 1mL培养基重悬细胞沉淀，轻轻吹打混匀后加入T25细胞培养瓶中，补足培养基至5 mL，置于37℃、5% CO₂培养箱培养。

(6) 48小时后换液，细胞融合接近80%时即可传代。

2. 细胞培养

Hela细胞用含10%胎牛血清、1%双抗的DMEM培养基在37℃饱和湿度、含5%CO₂的孵箱中培养。

3. 细胞转染及收样

(1) 铺板：处于对数生长期的目的细胞，胰蛋白酶消化成单细胞悬液，按实验需要接种于6孔板（2×10⁵个细胞/孔），根据细胞大小和形状调整接板细胞量。

(2) 培养：37℃、5%CO2培养箱中过夜培养，待细胞长至50%~60%汇合度进行转染。

(3) 质粒和脂质体准备：用125μL不含血清的培养基孵育4μg目的片段；125μL不含血清的培养基孵育8μL Lipo汉恒，静置5min；将含质粒和含有脂质体的培养基混合，混匀后室温静置20min。

(4) 弃去板中原有培养基，把混合液加入到细胞培养板中；4~6h后换成完全培养基。

(5) 继续培养24-48h。

4. 迁移实验

(1) 胰酶消化收集状态良好的目的细胞（已转染），制成单细胞悬液（无血清培养基配置，药物处理组含药物）；上室加200μL已调节好细胞密度的细胞悬液（7×10³个）；下室加500μL全培养基（小室外，24孔板孔内；药物处理组含药物）。

(2) 于37℃、5% CO₂细胞培养箱培养相应时间；

(3) 用4%多聚甲醛室温固定20 min，用棉签轻柔擦拭以去除小室内未迁移过去的细胞，注意操作以免刺穿底层聚碳酸酯膜；

(4) 在新的24孔板孔中加500μL结晶紫，室温染色10 min；

(5) 用PBS冲洗掉小室上多余的染料，置于空气中晾干；

(6) 100倍显微镜拍照，再用PS计数，计算各孔穿过膜的细胞数量。

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