前两篇我们总结了MCD饮食模型 vs 高脂饮食模型、非酒精性脂肪肝（NAFLD）动物模型评价指标等常见问题，今天来学习如何选择NAFLD/NASH动物模型——关键评价指标与实验设计全指南希望大家引以为鉴，能够避免这些普拉特泽为大家踩过的坑。

上篇：MCD饮食模型 vs 高脂饮食模型：非酒精性脂肪肝模型病理指标对比分析

下篇：非酒精性脂肪肝（NAFLD）动物模型评价指标

链接奉上，大家快点踩着普拉特泽生物的肩膀去摘苹果吧！那现在我们来接着进入今天的话题：

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)及其进展型非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的研究已成为肝脏疾病领域的重点，而选择合适的动物模型是研究成功的关键第一步。
本文将全面解析NAFLD/NASH模型的分类体系、选择策略、关键评价指标以及实验设计要点，帮助研究者建立高效可靠的研究方案。

1）NAFLD/NASH模型分类及选择策略

1. 饮食诱导模型：模拟人类代谢特征

▲高脂饮食(HFD)模型：

造模时间：16-24周可诱导单纯脂肪变性，32周以上出现NASH特征

优点：最接近人类代谢综合征特征

缺点：纤维化进展缓慢，需结合其他刺激

▲蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)模型：

造模时间：4-8周即可形成显著NASH

优点：造模周期短，炎症和纤维化明显

缺点：伴随体重下降，与人类代谢特征不符

▲高脂高果糖高胆固醇(HFHFrHC)模型：

造模时间：20-30周形成典型NASH伴纤维化

优点：最接近人类饮食结构

缺点：成本高，周期长

2） 基因修饰模型：研究特定通路机制

ob/ob和db/db小鼠：

特征：自发肥胖和胰岛素抵抗

适用：早期NAFLD研究

局限：单独使用难以形成显著NASH和纤维化

MAT1A-KO小鼠：

特征：自发肝脂肪变性和氧化应激

优势：研究氧化应激在NASH中的作用

造模时间：6个月出现纤维化

3）复合模型：加速疾病进展

▲STAM模型：

方法：新生期链脲佐菌素注射+HFD喂养

特点：16周内完成脂肪变性-NASH-肝细胞癌全过程

应用：抗癌药物筛选

▲DIAMOND小鼠：

特征：高脂高果糖饮食诱导

优势：高度模拟人类NASH组织学特征

评价：目前最接近人类NASH的模型之一

3）模型选择的关键考量因素

1. 研究目的导向选择

机制研究：

早期NAFLD：ob/ob小鼠+HFD(8-12周)

炎症机制：MCD模型(4-6周)

纤维化研究：HFHFrHC模型(24-30周)

药物开发：

抗炎药物：MCD模型

抗纤维化药物：CCL4+HFD复合模型

代谢调节药物：DIAMOND小鼠

2. 种属差异考量

小鼠模型：

优点：成本低，基因工具丰富

缺点：肝脏生理与人类存在差异

3.大鼠模型：

优势：采血量多，更适合长期研究

代表：Zucker fatty大鼠

非人灵长类：

价值：最接近人类生理

局限：伦理和成本问题

4）NAFLD/NASH关键评价指标体系

1. 基础表型评价

代谢参数：

体重增长曲线

空腹血糖和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)

血清脂质谱(TC、TG、LDL-C/HDL-C)

肝功能指标：

ALT/AST比值

ALP和GGT水平

血清白蛋白和胆红素

2. 组织学评价标准

NAFLD活动度评分(NAS)：

脂肪变性(0-3分

小叶炎症(0-3分)

肝细胞气球样变(0-2分)

诊断阈值：NAS≥5分可诊断NASH

纤维化分期：

天狼星红染色定量分析

Ishak或METAVIR评分系统

α-SMA免疫组化(肝星状细胞活化)

3. 分子标志物分析

炎症相关：

TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA表达

F4/80免疫染色(巨噬细胞浸润)

CCR2+单核细胞流式分析

纤维化相关：

Collagen I/III、α-SMA mRNA

TIMP-1/MMP-2比值

TGF-β/Smad通路蛋白

代谢相关：

SREBP-1c/FASN(脂肪合成)

PPARα/CPT1(脂肪酸氧化)

IRS-1/PI3K/Akt(胰岛素信号)

5）实验设计的核心要点

1. 标准化操作流程

样本采集：

固定时间点(上午8-10点)

禁食处理(6小时)

肝脏分区域取样(左叶/右叶)

组织处理：

OCT包埋(冰冻切片)

4%多聚甲醛固定(石蜡切片)

速冻保存(-80℃)

2. 质量控制关键点

模型验证：

设立中间时间点(如4、8、12周)

预实验确定最佳干预窗口

病理学双盲评估

数据分析：

代谢笼监测能量消耗

Micro-CT评估体脂分布

高通量测序数据验证

3. 转化医学考量

临床相关性：

选择与人类NASH组织学相似的模型

关注临床可检测的生物标志物

考虑性别差异(雄性更易造模)

药物测试规范：

设立预防性和治疗性给药组

监测药物对代谢参数的影响

多时间点动态评估疗效

6）常见问题解决方案

1. 造模失败排查

脂肪变性不明显：

检查饲料储存条件(避免氧化)

确认动物品系敏感性

延长造模时间

炎症反应不足：

增加饮食中胆固醇含量(1-2%)

结合低剂量CCL4刺激

改用MCD或HFHFrHC饮食

2. 数据变异控制

组内差异大：

严格统一动物周龄(±3天)

控制饲养环境(温度、光照周期)

同批次饲料喂养

病理评分不一致：

采用数字化病理分析系统

至少两位病理学家双盲评分

建立实验室内部评分标准

7）前沿模型发展方向

1. 类器官与微生理系统

肝脏类器官模型：

3D培养技术

患者来源个性化模型

药物毒性测试应用

器官芯片技术：

模拟肝脏微环境

多器官相互作用研究

实时监测细胞反应

2. 基因编辑新模型

CRISPR-Cas9定制模型：

特定基因突变引入

人类疾病等位基因敲入

条件性基因表达调控

人源化肝脏小鼠：

FRG小鼠模型

嵌合肝研究平台

人类病原体感染研究

结论：建立标准化研究范式

选择合适的NAFLD/NASH动物模型需要综合考虑研究目的、疾病阶段、种属特点和转化价值。建议研究者：

①根据科学问题选择最匹配的模型系统

②建立多层次评价指标体系

③实施标准化操作流程和质量控制

关注模型与人类疾病的临床相关性

通过系统化的实验设计和严谨的评价方法，可显著提高NAFLD/NASH研究的可靠性和转化潜力，为开发新型治疗策略提供坚实基础。

选择 [普拉特泽生物] 的理由：

▲丰富的模型选择： 我们提供多种肝纤维化模型，满足您不同的研究需求。

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