QPCR原理和主要的三个步骤
来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台
QPCR原理和主要的三个步骤由普拉特泽生物为大家总结分享,普拉特泽生物表达检测实验平台专业承接实时荧光定量PCR实验外包、Western blot 蛋白质免疫印迹等实验代做服务,积累专业丰富的实验操作经验。之前我们分享《QPCR检测实验详细的步骤与报告》,这期给大家出一期总结,主要是关于QPCR原理和主要的三个步骤总结,快点学起来吧!
一、QPCR原理
QPCR,即实时荧光定量PCR,是一种在DNA扩增过程中通过荧光信号进行实时监测的技术。其原理基于DNA双链复制过程中,每复制一次,就会有一个荧光分子被标记到新生成的DNA链上,通过检测荧光信号的累积,可以实时监测DNA的扩增过程。
二、QPCR的主要步骤
①样品制备:此步骤是进行QPCR实验的第一步,包括从生物样本中提取出DNA或RNA,并将其转化为适合PCR扩增的形式。这个过程通常包括细胞裂解、核酸提取和纯化等步骤。
②PCR扩增:在完成样品制备后,将DNA或RNA模板与引物和dNTPs混合,并在特定温度下进行扩增。在这个过程中,引物与模板DNA特异性结合,并在DNA聚合酶的作用下延伸,生成新的DNA链。这个过程会重复多次(通常是30-40次),以获得足够的DNA供后续分析。
③荧光检测:在PCR扩增过程中,每次DNA合成会产生一个荧光分子,这些荧光分子会被检测系统捕获并转化为电信号。这个电信号随后被转化为可以测量的数据,如CT值(阈值循环数)。通过比较不同样品在相同循环数下的荧光强度,可以确定样品中目标分子的相对数量。
通过以上三个步骤,qPCR技术能够在短时间内实现目标分子的高灵敏度、高特异性和实时监测。这种技术广泛应用于基因表达分析、突变检测、病原体定量以及基因组学和表观遗传学研究中。
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原理和主要的三个步骤
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