QPCR荧光定量基因表达量太低跑不出来怎么办?
来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台
Question:QPCR荧光定量基因表达量太低跑不出来怎么办?(普拉特泽生物提供长期稳定的QPCR代做外包服务)
答:QPCR实验中基因的表达量我们一般关注CT值的大小,CT值越高,表达量越低。
当CT值超过35时,证明基因表达量太低或几乎没有,我们可认为无意义。
CT值低的原因一般包括模板浓度低或存在PCR抑制物和扩增效率低两个,解决方法如下:
1、提高模板浓度;或提高RNA或cDNA稀释比例;或重新制备模板。
2、降低退火温度,或选用二步法扩增;组分和体系充分混匀;优化反应程序;或尝试更换试剂。
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