琼脂糖凝胶电泳试剂
来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台
Question:琼脂糖凝胶电泳试剂有哪些?(普拉特泽生物提供长期稳定的琼脂糖凝胶外包服务)
答:琼脂糖凝胶电泳是一种常用于生物化学和分子生物学实验的技术,用于分离和鉴定DNA、RNA和蛋白质等生物大分子。
以下是琼脂糖凝胶电泳所需的主要试剂及其相关信息的清晰归纳:
一、 琼脂糖
①作用:作为凝胶基质,用于制作凝胶板。
②浓度:琼脂糖的浓度会影响凝胶的孔径和分离效果。常用的琼脂糖浓度范围在0.3%至2.0%之间,具体浓度取决于待分离DNA片段的大小。
二、缓冲液
类型:
①电泳缓冲液:用于在电泳过程中提供离子和能量,维持样品和电泳过程中的pH值稳定。常用的电泳缓冲液有Tris-乙酸(TAE)、Tris-硼酸(TBE)和Tris-磷酸(TPE)等。其中,TBE和TPE缓冲容量高,DNA分离效果好,但TPE在DNA回收时含磷酸盐浓度高,容易使DNA沉淀;TAE缓冲容量相对较低,但价格较便宜。
②样品制备缓冲液:用于溶解和制备样品,如TBE或THE(Tris-HCl, EDTA)缓冲液。这些缓冲液通常含有指示染料(如溴酚蓝或二甲苯青FF)和蔗糖或甘油等,以增加样品的比重和可见性。
核酸染料
作用:用于染色和可视化核酸样品。
常用染料:
㈠溴化乙锭(EB):高度灵敏的嵌入性芳香族荧光化合物,但具有致癌性,使用时需小心。EB在紫外光照射下可激发出橙红色荧光,与DNA结合后荧光强度显著增强。
㈡其他替代染料:如GoldView(GV)染料,灵敏度与EB相当,但更安全环保。
㈢蛋白质染料作用:用于染色和可视化蛋白质样品。
㈣常用染料:考马斯亮蓝、银染料等。
琼脂糖凝胶制备试剂
除了琼脂糖和缓冲液外,还可能包括DNA酶抑制剂等,以防止DNA在制备过程中被降解。
样品加载试剂
如DNA Loading Buffer、Protein Loading Buffer等,用于将样品加载到凝胶板上,确保样品在电泳过程中均匀迁移。
终止剂
如琼脂糖凝胶电泳终止剂,用于终止电泳过程,但需注意其安全性和后续处理。
洗涤剂
如70%乙醇、缓冲液等,用于清洗实验器材,确保实验的清洁和准确性。
其他辅助试剂
如移液器、吸头、离心管、DNA Marker、蛋白质Marker等,用于实验操作和结果分析。
综上所述,琼脂糖凝胶电泳所需试剂种类繁多,每种试剂都发挥着重要作用。在实验过程中,应根据实验目的和具体要求选择合适的试剂,并严格按照操作规程进行操作,以确保实验结果的准确性和可靠性。
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