Masson三色染色又称马松染色,是显示组织中纤维的主要方法之一。普拉特泽生物承接Masson（马松）染色等病理染色相关服务上万例，积累了操作大量经验，为大家详细分享马松染色的实验操作步骤与染色结果分析，同时为广大科研工作者开展线上的理论培训与线下实操，可承接染色实验外包服务。

   Masson染色法是结缔组织染色中最经典的一种方法,其原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关,分子的大小由分子量来体现,小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织;而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而,淡绿或苯胺蓝的分子量都很大,因此Masson染色后肌纤维呈红色,胶原纤维呈绿色或蓝色,主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

 
  传统的马松染色使用四种染料，使组织切片呈现三种颜色，准确的称呼是马松三色染色法（Masson's trichrome stain）。第一种染料是苏木精，配制成Weigert氏铁苏木精液，与HE染色相似，这里的苏木精也是染细胞核，由于用的是铁苏木精，细胞核染色后不是经典HE染色的蓝色，而是呈现暗灰黑色，这是第一色。第二种染料酸性品红和第三种染料丽春红配制成混合溶液，这两种红色染料染与HE染色中的伊红相似，可以染细胞质为红色，这是第二色。第四种染料是甲基蓝（苯胺蓝也可），染胶原纤维为蓝色，这是第三色。经典的马松染色效果与HE染色对比如下图：

   这是小鼠皮肤组织两种病理染色图片，左边是马松三色染色，右边是HE染色。

   右边HE染色呈现蓝色和红色两种颜色，而左边马松三色染色有灰黑色、红色和蓝色三种颜色，尤为明显的是蓝色。左图中的大片蓝色区域是皮肤上皮组织，结构较为疏松，含有较多的胶原纤维，被马松三色染色法中的甲基蓝染成蓝色。这样染色后，可以清晰地看到毛孔在上皮结蹄组织中的分布。因此，被染成蓝色的细胞外基质（通常都含有胶原纤维）就能和细胞以及其他组织形成鲜明的对比，从而易于观察。在某些病理状态，如心肌梗死，肝硬化和肾纤维化等情况下，病变的细胞会被结缔组织取代，用马松染色能很好地发现病变部位，并能对病变进行定量的评估。因此，直到今天，马松染色依然是组织学和病理学中活跃的染色方法，并出现了几种改良的马松染色，使得染色效果更加理想。

   Masson（马松）染色实验操作试剂准备：

   1、Regaud 氏苏木精：苏木精1g，95%酒精10 ml，甘油10 ml，蒸馏水8 0ml，将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用。

   2、Masson丽春红酸性复红液： 丽春红0.7g，酸性复红0.3g，蒸馏水99 ml，冰醋酸1ml。

   3、0.2%冰醋酸水溶液： 冰醋酸0.2 ml，蒸馏水100 ml。

   4、1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100 ml。

   5、苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g，蒸馏水98 ml，冰醋酸2 ml。

   6、1%光绿水溶液：光绿 1g，蒸馏水100 ml。

   Masson（马松）三色法染色实验操作步骤：

   1． 石蜡切片脱蜡至水。

   2． 铬化处理或去汞盐沉淀（甲醛固定的组织此步可略）。

   3． 依次自来水和蒸馏水洗。

   4． 用Regaud苏木精染液或Weigert苏木精液染核5-10 min。

   5． 充分水洗,如过染可盐酸酒精分化。

   6． 蒸馏水洗。

   7． 用Masson 丽春红酸性复红液5-10 min。

   8． 以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。

   9． 1%磷钼酸水溶液分化3-5 min。

   10. 不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5 min。

   11．以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。

   12．95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固。

 
   Masson染色预期结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色（如光绿液染色为绿色），胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色，核黑蓝色。

   OK！那么Masson染色的实验操作过程与结果分析我们就分享到这里啦，想学习更详细的实验操作步骤的同学欢迎点击我们的春风学院——《Masson染色实操》专栏继续学习哦，当然如果您有Masson染色实验外包的需求，普拉特泽随时在在线任君采撷哦！