今天普拉特泽生物跟大家一起学习的是科研病理检测和临床实验室检查当中非常重要的技术——免疫组化/IHC操作步骤，文末附有免疫组化理论与实验操作的视频教程，大家可以自行学习。普拉特泽生物——病理实验平台专业承接免疫组化/IHC实验服务，为广大科研工作者或者科研小白提供专业可靠的帮助。

                          

        上文的免疫组化介绍中咱们讲到了，在预测免疫组化在良恶性肿瘤的组织细胞学起源、判别转移癌的起源部位、某些病理的亚型分类、肿瘤个体化治疗、肿瘤的预后判断都有一定的指导意义，那么这么重要的实验，步骤是不是很难呢，来看看吧~

        一、免疫组化实验器材准备

        生化培养箱、微波炉、生物组织摊烤机、冰箱、显微镜、盖玻片、载玻片、无水乙醇、双氧水、中性树胶、二甲苯、苏木素、PBS缓冲粉、柠檬酸缓冲液、鼠兔通用试剂盒、显色试剂盒

        二、免疫组化实验原理

        抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量。

        三、免疫组化实验步骤

        1、60℃烤片30~60 min；

        2、切片脱蜡水化：先将切片置于二甲苯中10 min，2次。然后依次在100%，95%，85%和75%乙醇，每级放置5-10 min。再用蒸馏水浸洗5 min；

        3、加入3%H2O2，室温10 分钟以灭活内源性酶。PBS冲洗3 min x 3次；

        4、热修复抗原：将切片浸入柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）,微波炉高火加热8min后拿出，冷却至室温。冷却后0.01M PBS（pH7.2~7.6）洗涤3 min x 3次；

        5、血清封闭：切片滴加5%羊血清放入湿盒中，室温20min。PBS洗涤3min×3次；

        6、孵育一抗：滴加适当稀释的一抗，对照组滴加等量PBS，4℃冰箱过夜；

        7、孵育二抗：将载玻片从冰箱中取出，37℃温箱复温30min；用PBS冲洗5 min x 3次；滴加50~100 μL二抗，37℃温箱孵育30 min；PBS冲洗5 min x 3次；

        8、标记：滴加HRP标记链霉亲和素，37℃温箱孵育20 min；

        9、DAB显色：将片子从温箱中取出，PBS冲洗5 min x 3次；滴加预制好的显色剂DAB工作液50~100 μL，室温孵育1-5 min， 镜下控制反应时间；

        10、复染：将显色后的片子蒸馏水洗涤，浸泡于苏木素中复染1-3 min，蒸馏水冲洗，PBS返蓝；

        11、脱水：各级酒精（60-100%）脱水，每级5 min；

        12、透明：取出后置于二甲苯10 min，2次；

        13、封片：中性树胶封片、显微镜观察。

        好了，免疫组化的完整实验步骤就到这里了！想更深了解免疫组化的同学可以点击《免疫组化理论+实操》视频学习，需要免疫组化实验外包的同学欢迎留言，我们会第一时间给到咨询回复。