免疫荧光实操注意事项由普拉特泽生物——病理实验平台总结分享，文末附上免疫荧光实操视频教程供大家学习。免疫荧光实验结果漂亮，适合放入高档次文章，但要得到一张好看又有参考意义的专业染色结果要注意很多操作上的细节，普拉特泽生物承接多例免疫荧光实验代做，给客户提供大量优质的实验报告与结果图，专业优质，值得信赖。

        那么免疫荧光有哪些注意事项呢？

        1、组织分切后，应迅速置入冰壶，并立即送至恒温切片机内进行包埋切片。

        2、如果不能马上切片，应将标本立即置入零下七十度的低温冰箱内以保持抗原活性，防止抗原的移位或丢失，但在低温冰箱内放置的时间不应超过两日。

        3、供免疫荧光检查的组织，应避免接触任何固定液，特别是含有乙醇的固定液。

        4、进行首次荧光抗体染色时，要做对照染色。

        5、 由于荧光容易淬灭，一般仅能维持几个小时，因此，荧光二抗应避光保存，即从加入荧光二抗以后的步骤中都要尽量避光操作，封片后应尽早照相。目前有市售的荧光增强剂，可使荧光在4℃保存1-2周仍不淬灭。

        6、 常用的荧光素有以下几种，绿色荧光：FITC、 Alexa Fluor 488和GFP；红色荧光：TRITC、Cy3、Alexa Fluor 568&594和Mito Tracker Red；蓝色荧光：Hoechst、DAPI；黄色荧光：YFP、Fluo-3和Rhoda-minel23等。

        7、不同的荧光素激发的波长不同，因此，选用滤光片时要注意。一般紫外线的激发波长为334-365nm，蓝光的激发波长为435-490 nm，绿光的激发波长为546nm左右。

        8、荧光显微镜应提前至少15 min打开汞灯预热。关闭30 min后方可再开启。

        9、免疫荧光的组织要求很高，载玻片及盖玻片要干净无杂质。进行荧光染色时，需注意染液的pH、浓度和染色温度，还要避免对荧光有熄灭作用的物质的接触。组织和细胞也有自发荧光，如红细胞中的血红蛋白呈红色荧光，维生素A呈绿色自发性荧光等。

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