免疫荧光信号不真实的原因及解决办法
来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台
免疫荧光是一种常用的生物学技术,但有时会出现免疫荧光信号不真实的情况,这可能是由以下原因引起的:
1.非特异性结合:抗体可能会与其他蛋白质非特异性结合,导致假阳性信号。
解决方法:使用适当的阻断剂,如牛血清白蛋白(BSA)或鱼胶蛋白(Gelatin)来防止非特异性结合。
2.自发荧光:样本本身可能会自发发出荧光信号,导致假阳性信号。
解决方法:使用适当的荧光淬灭剂,如苯甲酰丙氨酸(PFA)或苯乙烯二酸(Sodium azide)来淬灭自发荧光。
3.过度固定:过度固定细胞或组织会导致抗体无法穿透到细胞内部或组织内部,导致假阴性信号。
解决方法:优化固定条件,尽可能使用低浓度的固定剂和短时间的固定。
4.过度渗透:过度渗透可能导致抗体无法穿透到细胞内部或组织内部,导致假阴性信号。
解决方法:优化渗透条件,尽可能使用低浓度的渗透剂和短时间的渗透。
5.抗体质量:抗体质量不佳可能会导致假阳性或假阴性信号。
解决方法:选择质量可靠的抗体,并对抗体进行充分验证。
6.图像处理:图像处理过程可能会导致信号不真实。
解决方法:使用正确的图像处理软件和参数,并进行充分的图像分析和验证。
以上是一些免疫荧光信号不真实的原因及解决方法。在进行免疫荧光实验时,应该注意这些问题,并尽可能优化实验条件,以确保信号的真实性。
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