粒细胞检测实验原理与流程【粒细胞检测外包】
来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台
粒细胞检测实验步骤由普拉特泽生物技术为大家总结分享,粒细胞可由其在瑞氏染色下的表现分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞三种组成。普拉特泽生物流式检测平台为广大科研人员提供粒细胞检测实验外包服务,一起来学习吧!
粒细胞检测最常用的方法是流式检测,其实验原理是流式利用不同荧光物质标记的单克隆抗体,与待测成分作用,然后上流式细胞仪检测待测细胞。待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列,一个个迅速通过激光聚焦区,激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物发出的信号,利用这些信号,可计算出相对含量,从而得到细胞群的相对比值。
一、常用的检测指标中性粒细胞(人):CD15、CD16、CD49d(-)
噬碱性粒细胞(人):CD123、CD203c、CD117(-)
噬酸性粒细胞(人):CD11b、CD193、EMR1
中性粒细胞(鼠):CD11b、 Ly6G、CD115(-)
噬碱性粒细胞(鼠):CD200R3、 FcεRIα
噬酸性粒细胞(鼠):CD11b、CD193、F4 / 80
二、粒细胞检测的实验流程如下
1、制成单细胞悬液(组织样本)
2、溶血(细胞样本无需进行此步骤)
3、离心去上清
4、调整细胞密度
5、加入相应的标记抗体
6、孵育
7、洗涤后离心去上清
8、上机检测
三、粒细胞检测注意事项
1、为保证所得结果的可靠性,每次实验前应用标准荧光微球检测仪器的变异系数;
2、每次应做阴性对照、阳性对照、质控对照、以确保将各种试剂及操作过程对结果的影响降至最低;
3、外周血单个核细胞(PBMC)是一些科研实验中经常用的材料,是利用Ficoll从全血中提取得到,主要为淋巴细胞和单核细胞;需要检测粒细胞等多形核细胞,就需要避免用PBMC需提供全血。
好啦,那关于粒细胞检测的实验方法就讲完啦,如果您还还有什么其他的问题的话欢迎随时联系我们~