今天普拉特泽生物带我们讲：流式检测实验报告

最近有做流式的朋友来找我们咨询：

“流式检测实验操作是怎么样的呢？”

我们经过不断的尝试，总结了一些小小经验，分享给大家，希望能对各位做流式的朋友们有所帮助。

下面我们一起看看流式检测实验报告——细胞周期检测

流式细胞术检测THP-1-oe-NC、THP-1-oe-SLC25A37的周期情况变化。
二、实验样品

1.实验样本

2.实验参数

三、实验结果

1、流式检测细胞周期

四、实验结论

 根据周期检测结果可知，2组细胞组间无明显差异。
五、实验原理

细胞周期是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期：即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期，停止细胞分裂，执行一定生物学功能（G0期）。

由于细胞周期各时相的DNA含量不同，通常正常细胞的G1/ G0 期具有二倍体细胞的DNA含量（2N），而 G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA含量（4N） ,而S期的DNA 含量介于二倍体和四倍体之间。PI可以与DNA结合，其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此，通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为G1/G0 期，S期和G2/M 期,获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。

六、实验通用仪器及试剂

1. 主要仪器

2.主要试剂

一、实验步骤

1.细胞复苏

(1) 将ddH₂O预温至37℃。

(2) 戴上手套和口罩帽子，从液氮罐中取出装有目的细胞的冻存管（内有1 mL细胞混合液），立即投入37℃ ddH2O中，轻摇冻存管使之在1分钟内快速溶解。

(3) 完全溶解后，75%酒精擦拭冻存管外壁消毒后带进超净台。

(4) 在超净台中，在15 mL灭菌离心管中预先加入10 mL新鲜配制的培养基，打开冻存管，将所有冻融的细胞悬液加入该离心管中，常温1000 rpm离心3分钟，吸除上层的培养液。

(5) mL培养基重悬细胞沉淀，轻轻吹打混匀后加入T25细胞培养瓶中，补足培养基至5 mL，置于37℃、5% CO2培养箱培养。

(6) 48小时后换液，细胞融合接近80%时即可传代。

 2. 细胞预处理

 THP-1-oe-NC、THP-1-oe-SLC25A37细胞用含10%胎牛血清、1%双抗的1640培养基，在37 ℃饱和湿度、含5% CO₂培养箱中培养。

  3. 细胞处理

        (1) 铺板：处于对数生长期的细胞，胰蛋白酶消化成单细胞悬液（悬浮细胞直接收集离心），按实验需要接种于6cm皿中，根据细胞大小和形状调整接板细胞量。

         (2) 培养：37℃、5% CO₂培养箱中培养过夜，待细胞长至50%~60%汇合度进行处理。

   4.细胞收集及流式细胞周期检测

   （1）悬浮细胞直接离心收集；贴壁细胞用胰酶消化收集，并用含有10%FBS的培养基中和，收集1~5×106个细胞

   （2）1500 rpm离心5 min，除去上清，PBS洗涤细胞2次

   （3）去除上清，加入200 μl细胞周期快速检测试剂轻柔混匀，制成单细胞悬液

   （4）在1 h内，进行流式细胞仪检测

   （5）打开电脑和流式仪器及配套软件，记录开机时间

   （6）点开机器“开机流程”，按提示放入ddH2O流式管（体积至少2 mL）

   （7）点击“质控/标准化”进行质控流程

   （8）点击新建实验并命名

   （9）新建两个散点图及一个直方图，图一横纵坐标为“FSC”“SSC”，图二横纵坐标为“PE-A”“PE-H”，图三横坐标为“PE-A”

   （10）上样对照组，点击运行，调整电压参数，大约55左右，设置坐标轴（横坐标最大值=纵坐标最大值）、第一门及第二门

   （11）点击记录，最后一门收样1×104个细胞以上

   （12）保存实验数据，可用配套的流式软件直接分析或者导出FCS文件在modfit中分析

   （13）点击“流式仪”中“关机流程”，关闭机器，清理废液

今天关于流式检测实验就分享到这儿啦~如果您在实验过程中遇到技术问题，或者需要实验外包和代做，可与我们技术老师联系18570028002（微信同号）