考马斯亮蓝染色法介绍由普拉特泽生物分享，在蛋白质染色方法中，目前以考马斯亮蓝染色最为常用，因为它既克服了氨基黑染色灵敏度不高的限制，又比银染简便易操作。普拉特泽的生物病理实验平台长期为广大生物医学人员提供考马斯亮蓝染色实验外包服务。

        1、考马斯亮蓝染色介绍

        考马斯亮蓝染色是用考马斯亮蓝进行蛋白质染色的方法。考马斯亮蓝是一种阴离子染料， 常用考马斯亮蓝G250和R250。考马斯亮蓝 G250在游离状态下呈红色，当它与蛋白质 通过疏水结合后变为蓝色，蛋白质-色素结 合物在595 nm波长下有最大光吸收。其光 吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。

        2、考马斯亮蓝染色的历史

        考马斯亮蓝染色最早由 Fazekas 等在 1963 年用于醋酸纤维素膜电泳，并认为同样可用于纸电泳，琼脂糖电泳和淀粉凝胶电泳。1965 年 Meyer 等将此方法应用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。

        3、考马斯亮蓝染色的灵敏度

        考马斯亮蓝染色可以达到 0.2~0.5 μg（200~500 ng），最低可检出 0.1 μg蛋白；银染的灵

        敏度比考染高将近 100 倍，最低可以检出 2 ng 蛋白，通过考染条带的深浅粗细，可以大致判断该条带有多少蛋白。

        4、考马斯亮蓝染料的种类

        考马斯亮蓝分为 R-150、R-250、R-350、G-250 等。其中 R-350 最为灵敏，R 为红蓝色，G为绿蓝色。R-250 即三苯基甲烷，每个分子含有两个 SO3H 基团，偏酸性，与氨基黑一样也是结合到蛋白质的碱性基团上。G-250 即二甲花青亮蓝，是一种甲基取代的三苯基甲烷。

        推荐一种考染的方法

        ⑴ 电泳后的凝胶立即浸泡在固定液（500 ml 乙醇，100 ml 冰醋酸，400 ml 蒸馏水）中

        至少 30 min，如有必要可在固定液中浸泡过夜；

        ⑵ 将固定后的凝胶在热的染色液（0.29 g 考马斯亮蓝溶解在 250 ml 脱色液中，在使用前

        边搅拌边加热至 60℃）中浸泡 10 min，然后用蒸馏水将凝胶淋洗一次；

        ⑶ 多次变换脱色液（250 ml 乙醇，80 ml 冰醋酸，加蒸馏水至 1 L），直至凝胶背景脱净

        为止，为加快脱色，可略加温度；以上各步最好用振荡器（摇床）震荡染色皿。

        ⑷ 为了防止凝胶干燥后的龟裂，脱去背景色的凝胶在保存液（25 ml 87% 甘油加 225 ml 脱

        色液）中浸泡 30 min。然后将凝胶放在玻璃板上，再用保存液浸湿玻璃纸包住凝胶在室温下晾干。

        如果您也准备考马斯亮蓝染色的考马斯亮蓝染色的方法不是唯一的，你可以参考几种之后总结一个适合自己的方案出来，有什么不懂得欢迎随时给普拉特泽留言~