Question：巨噬细胞纯化的方法有哪些？（普拉特泽生物提供长期稳定的细胞实验外包服务）

        答：巨噬细胞也称组织细胞，是由血液中的单核细胞穿出血管后分化而成的。我们常用的巨噬细胞的纯化方法主要有贴壁法和梯度离心法两种，详细操作如下：

        1、贴壁法纯化巨噬细胞

        （1）用含20％～40％小牛血清的RPMI-1640培养液将巨噬细胞配成2×106～4×106/ml的浓度。以每平方厘米2×105～4×105个巨噬细胞的密度将细胞悬液接种到玻璃培养皿（瓶）或塑料培养皿（瓶）中。37℃5％CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养1小时或24小时。1小时培养节省时间但会丢失一些粘附力弱的巨噬细胞，而24小时可以得到较多的巨噬细胞。20％～40％的小牛血清可以减少B淋巴细胞的粘附。

        （2）摇晃培养皿（瓶），悬浮未粘附细胞，吸出细胞悬液。用预温的Hanks液洗涤细胞3～4次。悬浮细胞可重复粘附，得到更多巨噬细胞。用适量含2.5mmol/LEDTA的无钙镁Hanks液消化细胞37℃15～30分钟。用吸管吹打分离细胞，离心250×g10分钟，去上清液。

        （3）用预冷的Hanks液洗涤细胞3～4次，每次离心250×g10分钟，去上清液。最后用含10％小牛血清的RPMI-1640培养液悬浮细胞，台盼蓝染色计数细胞并决定细胞活力，将细胞配成所需的浓度。

        2、梯度离心法纯化巨噬细胞

        （1）取15ml离心管，将制备好的各浓度密度梯度材料按下浓上淡的顺序依次分层加在离心管中，每个浓度2ml。最后加上上述巨噬细胞悬液3～5ml（约含2×107～5×107细胞）。

        （2）4℃中，水平离心1000×g30分钟，垂直取出离心管，小心吸出各交界面的细胞。分别用预冷的含1％小牛血清RPMI-1640培养液洗涤各交界面细胞2次，每次200×g10分钟。用含10％小牛血清的RPMI-1640培养液将细胞配成所需的浓度。

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