酵母双杂交实验采用的系统有哪些?
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酵母双杂交实验是一种常用的蛋白质互作研究方法,通过检测两个不同的蛋白质是否能够相互结合,来推断它们之间可能存在的相互作用关系。
(酵母双杂交实验图)
下面列出几种常用的酵母双杂交实验系统:
1. Gal4系统:在该系统中,承载DNA结合域Gal4(DBD)的表达载体和承载激活域Gal4(AD)的表达载体连接后,形成一个功能完整转
录因子,从而激活荧光素酶基因报告系统。
2. LexA系统:在该系统中,LexA DNA结合域(DBD)与LexA激活域(AD)分别构建到表达载体上,当两个载体共转染至酵母细胞时,如
果采用reporter construction体系,则可以依据β-galactosidase、URA3或LEU2等物质检测双杂交结果。
3. T7 RNA聚合酶系统:该系统中,T7 RNA聚合酶被拆分成两个部分,其中一个与测试蛋白(预编码)结合,另一个与受测蛋白(靶标)
结合,从而激活T7 RNA聚合酶的活性。
4. 金属感应系统:在该系统中,分别将金属Io10 DNA结合域和MYC激活域构建到表达载体上,在转染至酵母细胞以后,通过添加金属子
(如Cu2+、Ni2+等),使金属离子与特定氨基酸残基配对,从而促进两种蛋白质间相互结合。
以上这些系统是常用的酵母双杂交实验系统,它们都有各自的优缺点,选择适当的实验系统,有助于提高实验效率和可靠性。
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