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酵母双杂交实验采用的系统有哪些?

2023-04-07 11:51:11

来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台

 

 
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酵母双杂交实验是一种常用的蛋白质互作研究方法,通过检测两个不同的蛋白质是否能够相互结合,来推断它们之间可能存在的相互作用关系。





                                                                                           (酵母双杂交实验图)                                                                                            



下面列出几种常用的酵母双杂交实验系统:



            1. Gal4系统:在该系统中,承载DNA结合域Gal4(DBD)的表达载体和承载激活域Gal4(AD)的表达载体连接后,形成一个功能完整转

            录因子,从而激活荧光素酶基因报告系统。


            2. LexA系统:在该系统中,LexA DNA结合域(DBD)与LexA激活域(AD)分别构建到表达载体上,当两个载体共转染至酵母细胞时,如

            果采用reporter construction体系,则可以依据β-galactosidase、URA3或LEU2等物质检测双杂交结果。


            3. T7 RNA聚合酶系统:该系统中,T7 RNA聚合酶被拆分成两个部分,其中一个与测试蛋白(预编码)结合,另一个与受测蛋白(靶标)

            结合,从而激活T7 RNA聚合酶的活性。


            4. 金属感应系统:在该系统中,分别将金属Io10 DNA结合域和MYC激活域构建到表达载体上,在转染至酵母细胞以后,通过添加金属子
       
           (如Cu2+、Ni2+等),使金属离子与特定氨基酸残基配对,从而促进两种蛋白质间相互结合。




以上这些系统是常用的酵母双杂交实验系统,它们都有各自的优缺点,选择适当的实验系统,有助于提高实验效率和可靠性。



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