来看个甲基化吧？

圈圈圆圆圈圈，天天年年天天~喔呜喔~你看清棋局了吗？

那接下来就介绍一下我们今天的主角---BSP，即Bisulfite Sequencing PCR，BSP克隆测序法，是目前甲基化检测的金标准。

很多老师们的研究中都会涉及DNA甲基化，因为这种DNA修饰方式在不改变基因序列前提下实现了对基因表达的调控。比如在肿瘤发生时，抑癌基因CpG岛以外的CpG序列非甲基化程度增加，CpG岛中的CpG则呈高度甲基化状态，导致抑癌基因表达的下降。

所有存在CpG岛的基因（包括启动子区域、基因本体）都可以用BSP来进行检测。

· 正 · 经 · 介 · 绍 ·

DNA甲基化是最早发现的修饰途径之一，真核生物中甲基化仅发生于胞嘧啶，即在DNA甲基化转移酶（DNMTs）的作用下的CpG二核苷酸5’端的胞嘧啶转变为5’-甲基胞嘧啶。

大量研究表明，DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。DNA甲基化通常抑制基因表达，去甲基化则诱导了基因重新活化和表达，这种DNA修饰方式在不改变基因序列的前提下实现对基因表达的调控。

 BSP实验原理：

用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变；随后在CpG岛两端设计引物进行PCR，将目的产物纯化后进行TA克隆，每个克隆挑取阳性克隆测序，最后将测得的序列与原始序列比对，统计甲基化位点及数量，并分析甲基化程度。

基于重亚硫酸盐转化的甲基化分析原理

BSP实验样品要求：

1. 组织样本：≥50 mg， -20℃保存，冰袋运输；

2. DNA样本：体积≥20ul，浓度≥100ng/ul，DNA总量≥2ug，-20℃保存，低温冰袋运输。

3. 血液样本：要求保存于抗凝管中或冻存管中，体积大于1ml

4. 细胞样本：10^6个以上。

（不符合要求的样品还是悄咪咪的重新准备样品吧，不然很可能做不出来结果。）

技术路线：

Emmm......技术路线太长，偷个懒，大家有问题的都去麻烦我们技术支持小姐姐代为回答，以下是她微信二维码

扫它扫它，就是它↑↑↑

不麻烦的问题，还是由我带大家来看一下：BSP的结果展示

BSP结果与分析：

点状图

展示甲基化的经典方法，白色空心点表示未发生甲基化的CG位点，黑色实心点表示发生甲基化的CG位点。

柱状图

目的基因待测片段的综合甲基化水平，分别综合统计整个序列在实验组和对照组中的甲基化比例（黑色实心点数/黑色实心点数+白色空心点数），将实验组与对照组的甲基化比例为数据源，制作柱状图。

好啦~围棋就教到这儿~