组织样本单细胞悬液制备方法由普拉特泽生物细胞实验平台分享，细胞实验平台专为大家提供各类细胞实验外包服务。单细胞悬液是把组织块或贴壁培养的细胞消化吹打以后形成的悬液，使粘连的细胞都分开。本文咱们就以组织样本为例，为大家介绍单细胞悬液的制作方法。

        一、单细胞悬液组织样本

        1、常见的组织类型：⼩⿏脾脏、肝脏、⼼脏、肺脏、脑组织、肿瘤组织、⼈肿瘤组织、⽪肤组织等

        2、传统组织处理⽅法：机械法：⽹搓法、研磨法

        3、适⽤样本类型：脾脏、淋巴结、胸腺

        二、各样本处理方法操作步骤

        1、⽹搓法

        （1）将300⽬尼龙⽹扎在⽆菌的⼩烧杯上；

        （2）把剪碎的组织放在⽹上，以眼科镊⼦轻轻搓组织块，边搓边加⽣理盐⽔冲洗，直到将组织搓完；

        （3）收集细胞悬液于离⼼管中， 1500rpm离⼼5 min；弃上清液，加红细胞裂解液重悬沉淀，室温作⽤5 min，加等体积的PBS中和后，1500rpm离⼼5 min，弃上清，⽤PBS洗涤⼀次，再⽤PBS重悬，细胞计数后即可使⽤。

        2、研磨法

        （1）先将组织剪成1-2mm⼤⼩组织块；

        （2）放⼊组织研磨器中，转动研棒，研⾄匀浆；

        （3）加⼊10ml⽣理盐⽔，冲洗研磨器；

        （4）收获细胞悬液，并经200⽬尼龙⽹过滤，1500rpm离⼼5 min；

        （5）弃上清液，加红细胞裂解液重悬沉淀，室温作⽤5min，加等体积的PBS中和后，1500rpm离⼼5 min，弃上清，⽤PBS洗涤⼀次，再⽤PBS重悬，细胞计数后即可使⽤。

        3、酶解法：胰蛋⽩酶类、胶原酶、溶菌酶、弹性蛋⽩酶

        适⽤样本类型：肝脏、肾脏、⼼脏、肺脏、脊髓、脑、肠道、⽪肤、肿瘤等；

        三、组织样本单细胞悬液制作操作步骤

        1、先将组织剪成泥状。

        2 、⽤胰蛋⽩酶或胶原酶消化组织块。

        胰蛋⽩酶适⽤于消化细胞间质较少的软组织，如胚胎、上⽪、肝、肾等组织。胰蛋⽩酌⼯作浓度⼀般为 0. 1 %—0 . 5 % 。对于纤维较多的组织或较硬的癌组织常⽤0 . 25 %胶原酶，胶原酌对组织中胶原蛋⽩类结构消化作⽤强，它仅对细胞间质有消化作⽤⽽对上⽪细胞影响不⼤。胶原酶常⽤浓度为 0 . 1—0 . 3ug / ml ，⽤⼤于组织量30—50 倍的胰蛋⽩酶液或胶原酶液在 37°C ，摇床上消化组织，消化时间的长短依组织类型⽽定，⼀般来说，胰蛋⽩酶油作⽤ 20—60 min，胶原酶需1—4h左右，⼀般还会加⼊DNA核酸内切酶。

        3、消化完毕后，将细胞悬液通过200⽬孔径尼龙⽹过滤，以除掉未充分消化的组织；

        4、已过滤的细胞悬液经1500rpm离⼼5 min后，弃上清液，加红细胞裂解液重悬沉淀，室温作⽤5 min，加等体积的PBS中和后，1500rpm离⼼5 min，弃上清，⽤PBS洗涤⼀次，再⽤PBS重悬，细胞计数后即可使⽤。

        好啦，那关于组织样本的单细胞悬液制备方法就讲完啦，如果您也在细胞实验上有什么不懂的问题或有细胞实验外包的需求欢迎随时联系~