CCK8，全称为Cell Counting Kit-8，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。普拉特泽生物承接CCK8等细胞实验相关服务上万例，积累了操作大量经验，为大家详细分享cck8检测实验报告，同时为广大科研工作者开展线上的理论培训与线下实操，可承接细胞实验外包服务。

一、实验目的

检测THP-1-oe-NC、THP-1-oe-SLC25A37细胞增殖能力的变化。

二、实验样品

1.实验样本

备注：包括干预细胞用的相关试剂均按实验样品登记，每行登记一个或一组独立样品。
2. 实验参数

三、实验结果

表1：CCK8法检测细胞OD值

四、实验结论

 如图所示，与oe-NC组相比，感染oe-SLC25A37病毒组细胞增殖能力上调。

五、实验原理

Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

六、实验通用仪器及试剂

1.主要仪器

2.主要试剂

七、实验步骤

3.1 细胞复苏

(1)     将ddH₂O预温至37℃。

(2)     戴上手套和口罩帽子，从液氮罐中取出装有目的细胞的冻存管（内有1 mL细胞混合液），立即投入37℃ ddH2O中，轻摇冻存管使之在1分钟内快速溶解。

(3)     完全溶解后，75%酒精擦拭冻存管外壁消毒后带进超净台。

(4)     在超净台中，在15 mL灭菌离心管中预先加入10 mL新鲜配制的培养基，打开冻存管，将所有冻融的细胞悬液加入该离心管中，常温1000 rpm离心3分钟，吸除上层的培养液。

(5)     1ml培养基重悬细胞沉淀，轻轻吹打混匀后加入T25细胞培养瓶中，补足培养基至5 mL，置于37℃、5% CO2培养箱培养。

(6)     48小时后换液，细胞融合接近80%时即可传代。

3.2 细胞培养

THP-1-oe-NC、THP-1-oe-SLC25A37细胞用含10%胎牛血清、1%双抗的1640培养基，在37℃饱和湿度、含5% CO₂的培养箱中培养。

3.3 细胞铺板

(1)     取对数生长期THP-1-oe-NC、THP-1-oe-SLC25A37细胞，细胞计数。

(2)     将细胞种到96孔板中，密度为20000个细胞/孔，继续培养。

(3)     待细胞贴壁后，0、24、48、72h后进行cck8检测。

3.4 CCK8检测实验步骤

(1) 各组细胞在检测时间点时，每孔加1/10体积 CCK8，在37℃、5％CO₂培养箱中培养3小时；

(2) 选择450 nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，OD值为纵坐标绘制折线图。

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