一、阿利新蓝染色实验简介与原理

阿利新蓝（Alcian）又称爱先蓝或阿尔辛蓝等，是一种类铜钛花青共轭染料，这种阳离子染料与酸性基团结合，即阿尔辛蓝与组织内含有的阴离子基团如羧基和硫酸根形成不溶性复合物。阿利新蓝由中央含铜的酞菁环与四个异硫脲基通过硫醚键相连而成。该异硫脲基呈中度碱性，使阿利新蓝带阳离子。利用染液的不同pH值可区分粘液物质的类属，pH 值为2.5时组织内的羧基电离，带有一个负电荷，与阿利新蓝中的阳离子形成盐键，是带有羧基的组织（如蛋白多糖/透明质酸以及上皮酸性黏蛋白）染色。pH值为1.0时，组织内的硫酸根电离，带有一个负电荷，与阿利新蓝中的阳离子形成盐键，使带有硫酸根的组织（如硫酸黏液物质）染色。中性黏蛋白(如胃黏膜和Brunner腺体部位的中性黏蛋白）不能与阿利新蓝反应。

二、阿利新蓝染色临床意义

临床采用阿利新蓝染色法进一步鉴别各类血细胞提高对急性早幼粒细胞白血病诊断具有重要意义。阿利新蓝是一种阳离子染料，与酸性基团形成盐后，使胞质中的酸性粘多糖染成蓝色，定位于胞质内。粒细胞系原粒细胞呈阴性反应，早幼粒细胞呈中度阳性，成熟中性粒细胞则为弱阳性或阴性反应。巨核细胞为阳性反应。单核细胞阳性反应应表现为胞质边缘染成蓝色。淋巴细胞和幼红细胞呈阴性反应。

三、阿利新蓝染色实验步骤（样本与实验目的不同步骤均有不同）

Step1：烘片、脱蜡。65℃烘片30min；依次经二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ脱蜡

Step2：依次经无水乙醇Ⅰ、95%Ⅰ、85%、75%、自来水水化。

Step3：阿尔新蓝染色液染色依次入 Alcian 酸化液、 Alcian 染色液染色浸泡，流水冲洗：入核固红染色液复染，流水冲洗。（染色过程可在镜下控制，适当调整时间）

Step4：脱水。依次经85%、95%Ⅰ、95%Ⅱ各10秒，无水乙醇Ⅰ30s、无水乙醇Ⅱ1min

Step5：透明。经二甲苯Ⅰ1min、二甲苯Ⅱ2min

Step6：封片。组织上方滴加中性树胶，玻片稍倾斜，用手将盖片顺玻片斜面轻放，防止气泡产生

Step7：20g儿甲绿复染10~20min

Step8：显微镜下观察拍照

四、阿利新蓝染色常见问题分析及原因解析

问题1：染色过深或过浅

解决办法：控制好染色时间。

问题2：切片染色不均

解决办法：取材固定不当，取材规范标准，固定彻底；脱水不够，重新脱水、透明、浸蜡。

问题3： 切片染色模糊不清

解决办法：包埋蜡温度过高；脱水透明不彻底。